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细胞培养中常见的污染以及解决方案
发布时间:2020-04-23 点击量:218

细胞培养中常见的污染情况总结如下

常见的污染如下:

1、细菌:细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感染细菌的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况,是否在高压灭菌时放气时间足够,压力足够!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,一定要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!可在培养液中加相应的抗生素处理

2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,

用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有细胞暂时转移,采用过氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时,使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后,再移入细胞。孵箱应定期清洁(2月左右),尤其在多雨的季节。

其它培养箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外灯照。预防霉菌污染,可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗;但细胞一旦污染,很难挽救,制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补,建议舍弃该污染细胞。,将环境彻底消毒,如果所有细胞都污染,可能是系统污染,检查一下培养基和器材,如果只是个别污染,可能是操作问题,就要注意操作

3、支原体:黑色的,好象多为多形,培养液一般培养液一般会浑浊,原体感染,国内血清很多都没有做支原体阴性检测,而支原体是牛血清中的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后,细胞病变不很明显,只是慢慢去。用泰乐菌素,兽用支原体病的药,但可用于细胞培养,无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。

4、黑蛟虫:可以穿透滤膜,也可以通过空气传播,低倍下为黑色点状,高倍下可看见黑色的小虫游来游去,培养液也是不浑的,一般不会太影响,细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好,且观测到的运动物无明显增多,且培养液颜色、透明度无明显变化,可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响,在细胞增殖旺盛之后会自然消失,除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话,可以增加细胞的种板密度,以提高细胞的生存率。

5、真菌:一般培养液清亮,不变色,镜下有丝状物,有些真菌开始很像死细胞碎片,只是它很多很多的小块很清楚,象珊瑚状,不象细胞碎片分不清,慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢,不象细菌那么容易被发现,但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了,也很难救活了。

6、原虫:培养液可轻微浑浊,显微镜下那些细小的点状物数量非常多,轻微活动,细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的,但他们的数量小,细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。

污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等

关于培养基的无菌状况,取培养基至培养瓶中(不加细胞),37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。也可以在培养基中事先加入双抗(硫酸链霉素和氨苄青霉素)。但双抗有时会影响细胞的状态,所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗,以避免影响实验结果。

1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射,并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水

2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素

3、超净台的风机不能过大,风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染

4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水喷洒中和,约几小时即可进入操作

细胞库细胞

SHG-44 人胶质瘤细胞
SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞
SHZ-88大鼠乳腺癌细胞
SiHa人子宫颈鳞癌细胞
SK-BR-3人乳腺癌细胞
SK-Hep-1人肝癌细胞
SK-MES-1人肺鳞癌细胞
SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞
SK-OV-3人卵巢癌细胞
SMMC-7721人肝癌细胞
SP2/0小鼠骨髓瘤细胞
SPC-A-1人肺癌细胞
ST猪睾丸细胞
STO小鼠胚成纤维细胞
SVEC4-10小鼠淋巴结内皮细胞
SV-HUC-1人膀胱上皮永生化细胞
SW480人结肠癌细胞
SW579人甲状腺鳞癌细胞  
SW620人结肠癌细胞
SW626人卵巢癌细胞
T24人膀胱移行细胞癌细胞
T-47D人乳腺管癌细胞
T84人结肠腺癌肺转移细胞
Tca-8113人舌鳞癌细胞
TE-1人食管癌细胞
TF-1人血液白血病细胞
THP-1人髓系白血病单核细胞
TM3小鼠睾丸间质细胞
TSCCa人舌鳞癌细胞
U-2 OS人骨肉瘤细胞
U251人神经胶质瘤细胞
U-87 MG人脑星形胶质母细胞瘤细胞
U-937人组织细胞淋巴瘤细胞
V79仓鼠肺细胞
VCaP人前列腺癌细胞
Vero非洲绿猴肾细胞
WI-38人胚肺细胞
WISH人羊膜细胞
Y1(Y-1)小鼠肾上腺皮质细胞
YAC-1小鼠淋巴瘤细胞
ZR-75-1人乳腺癌细胞
ZR-75-30人乳腺癌细胞
16HBE人支气管上皮样细胞
801-D 人巨细胞性肺癌细胞
MC3T3-E1 Subclone 24小鼠胚胎成骨细胞前体细胞
A2 人腺样囊性癌细胞
A-427人肺癌细胞
A-498人肾癌细胞
A875人黑色素瘤细胞
AM 人腺样囊性癌细胞(高转移)
BC-009人乳腺癌细胞
BC-019人乳腺癌细胞
BC-020人乳腺癌细胞
BC-021人乳腺癌细胞
BC-022人乳腺癌细胞
BE(2)-M17人神经母细胞瘤细胞
L6565小鼠白血病克隆细胞系
C918人眼脉络黑色素瘤细胞
CAL 27人舌鳞癌细胞
LS 180人结肠腺癌细胞
CNE-2Z 人鼻咽癌细胞
COLO 201人结直肠腺癌细胞
CW-2人结肠癌细胞
CRT 人神经胶质瘤细胞
D283 Med人脑髓母细胞瘤细胞
EA.hy926人脐静脉细胞融合细胞
ECV-304人脐静脉内皮细胞
EJ 人膀胱癌细胞
NCI-H1395人肺腺癌细胞
H-97 人高转移肝癌细胞
HCC 94(HCC941122)人子宫鳞癌细胞(高分化)
HCCLM3人高转移肝癌细胞
UMNSAH/DF-1鸡胚成纤维细胞
HEL 人红白细胞白血病细胞
HELF 人胚肺成纤维细胞
HO-8910PM 人高转移卵巢癌细胞
Ishikawa 人子宫内膜癌细胞
CTLA4 Ig-24中国仓鼠卵巢细胞
3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纤维细胞
M1小鼠白血病细胞
M14 人黑色素瘤细胞
MA-891 小鼠乳腺癌高转移细胞
MDA-MB-435 人乳腺癌高转移细胞
MDA-MB-468 人乳腺癌细胞
MKN-28人胃癌高转移细胞
MKN-45人胃癌细胞
MuM-2B 人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞
MuM-2C 人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞
MV3 人黑色素瘤细胞
MX-1 人乳腺癌细胞
Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤细胞
NCI-H1975人肺腺癌细胞
NCI-H460 人大细胞肺癌细胞
NCI-H661人大细胞肺癌细胞
M-NFS-60 小鼠髓性白血病淋巴细胞/小鼠白血病G-CSF依赖性细胞
PA319 人大肠癌细胞
PATU8988 人胰腺癌细胞
PC-3M 人前列腺癌细胞
SF-295 人XG恶性胶质瘤细胞
SMC-1人胸膜瘤细胞
SW1116人结肠腺癌细胞
TE-13 人食管癌细胞
TG-905 人脑胶质母细胞瘤细胞
VE 人血管内皮细胞
293E人胚肾细胞(EBNA1基因修饰)
293ET人胚肾细胞(SV40T和EBNA1基因修饰细胞)
293FT人胚肾细胞
2V6.11人胚肾细胞
A3人T淋巴细胞白血病细胞
A7r5大鼠胸大动脉平滑肌细胞
AML-193人急性单核细胞白血病单核细胞
B16-F1小鼠黑色素瘤细胞
B16-F10小鼠皮肤黑色素瘤细胞
BC3H1小鼠脑瘤细胞
BEL-7405人肝癌细胞
Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞
BNL 1ME A.7R.1小鼠肝上皮细胞
BT-20人乳腺癌细胞
C3H/10T1/2, Clone 8小鼠胚胎成纤维细胞
Caki-2人肾透明细胞癌细胞
Calu-6人肺退行性癌细胞
CEM/C1人急性淋巴细胞白血病细胞
Chang liver人张氏肝细胞
Detroit 562人咽头癌胸水转移细胞
CTLL-2小鼠T细胞
Dami人巨核细胞白血病细胞
E.G7-OVA小鼠T淋巴瘤细胞
EB-3人Burkitt淋巴瘤细胞
EBTr (NBL-4)牛胚气管细胞
FC33人胚胎肾细胞(Asp-2基因修饰)
FO小鼠骨髓瘤细胞
G1发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞
G-401人肾癌Wilms细胞
GH3大鼠垂体瘤细胞
H22小鼠肝癌细胞
H4-II-E-C3大鼠肝癌细胞 
HA人羊膜细胞
OKT 11小鼠杂交瘤细胞(抗CD2)
HB611人肝癌细胞
HBE人支气管上皮样细胞
HCC38人乳腺导管癌细胞
Hce-8693人盲肠腺癌细胞(未分化)
HeLa 299人宫颈癌细胞
HeLa S3人宫颈癌细胞
Hep B1.2人肝癌细胞
HFF-1人包皮成纤维细胞
hFOB 1.19SV40转染人成骨细胞
HFSF人胚胎眼巩膜成纤维细胞
HFT-8810人胎儿胸腺细胞株
HGF-1人牙龈成纤维细胞
HHCC人肝癌细胞
HKC人肝癌细胞
HLF-a人肺细胞
HOS人骨肉瘤细胞
HPAC人胰腺腺泡上皮癌
HS 683人脑胶质瘤细胞
Hs68人男性正常头细胞
HuT 78人T淋巴细胞白血病细胞
HuTu-80人十二脂肠腺癌
IAR20大鼠肝细胞
IM-9人外周血B淋巴细胞
INS-1大鼠胰岛细胞瘤细胞
IR983F大鼠骨髓瘤细胞
J774A.1小鼠单核巨噬细胞
K7M2 wt小鼠骨肉瘤成骨细胞
KATO III人胃癌细胞
KiMA人胚肾上皮细胞
KP-N-NS人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移)
L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞
LA795小鼠肺腺癌细胞
LLC-WRC 256大鼠腹水癌细胞
MC3T3-E1  Subclone 14小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14
MCF 7B人乳腺癌细胞
MDA-MB-157人乳腺癌细胞
MDA-MB-175VII人乳腺导管癌细胞
MDA-MB-415人乳腺癌细胞
MDA-MB-436人乳腺癌细胞
MDA-MB-468-06人乳腺癌细胞
MFC-GFP小鼠前胃癌细胞(绿色荧光蛋白标记)
MPC-11小鼠浆细胞瘤
MS751人子宫颈表皮癌细胞
NCI-H157人非小细胞肺腺癌细胞
NCI-H1688人典型小细胞肺癌细胞
NCI-H1703人肺鳞癌细胞
NCI-H205人肾上腺腺瘤细胞
NCI-H2087人非小细胞肺腺癌细胞
NCI-H209人小细胞肺癌细胞
NCI-H2170人肺鳞癌细胞
NCI-H2227人小细胞肺癌细胞
NCI-H226人肺鳞癌细胞
NCI-H23人非小细胞肺癌细胞
NCI-H2452人间皮瘤细胞
NCI-H295R人肾上腺皮质腺癌细胞
NCI-H358人非小细胞肺癌细胞
NCI-H446人小细胞肺癌细胞
NCI-H520人肺鳞癌细胞
NCI-H524人非小细胞肺癌细胞
NCI-H596人肺腺鳞癌细胞
NCI-H716人结直肠腺癌细胞
NCI-H838人非小细胞肺癌细胞
NCTC 1469小鼠正常肝细胞
NEC人食管癌细胞
P3/NSI/1-Ag4-1 [NS-1]小鼠骨髓瘤细胞
P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞
PA-1人卵巢畸胎瘤细胞
PC-12(未分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化)
PC-3M-2B4人前列腺癌低转移细胞株
PC-3M IE8人前列腺癌高转移细胞株
PLC/PRF/5人肝癌亚力山大细胞
Psi2 DAP小鼠胚胎成纤维细胞
QG-56人肺扁平上皮癌细胞
QGY-7703人肝癌细胞
QSG-7701人肝细胞
R 1610仓鼠肺细胞
RAG小鼠肾腺癌细胞
RBL-1大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞
RIN-m5f大鼠胰岛β细胞瘤细胞
RK1大鼠肾细胞
RKO-AS45-1人结肠癌转基因细胞
RKO-E6人结肠癌转基因细胞
RL1大鼠肺成纤维样细胞
RM1大鼠肌肉成纤维样细胞
Romas人淋巴瘤细胞
RS1大鼠皮肤成纤维样细胞
RT4人膀胱移行细胞乳头瘤细胞
RTE大鼠气管上皮细胞
RWPE-2人前列腺正常细胞
SC-1小鼠胚胎细胞
SF126人脑瘤细胞
SF17人脑瘤细胞
SF763人脑瘤细胞
SF767人脑瘤细胞
SK-CO-1人结直肠腺癌细胞
SK-MEL-1人皮肤黑色素瘤细胞
SK-N-BE(2)人神经母细胞瘤细胞
SK-NEP-1人肾母细胞瘤细胞
SK-N-MC人神经上皮瘤细胞
SNU-5人胃癌细胞
Sp2/0-Ag14小鼠骨髓瘤细胞
SUP-B15人Ph+急淋白血病细胞系
SW 1353人软骨肉瘤细胞
SW 1990人胰腺癌细胞
SW 780人膀胱移行细胞癌
SW 982人滑膜肉瘤细胞
SW-13人肾上腺皮质癌细胞
T/G HA-VSMC人血管平滑肌细胞
TE-10人食管癌细胞
TE-11人食管癌细胞
L5178Y TK+/- clone (3.7.2C)小鼠淋巴瘤细胞
TM4正常小鼠睾丸Sertoli细胞
TT人甲状腺导管癌细胞
U-118 MG人脑星形胶质母细胞瘤
U14小鼠子宫颈癌细胞
U14-GFPGFP标记的小鼠子宫颈癌细胞
UACC-812人乳腺导管瘤细胞
UMR-106大鼠骨肉瘤细胞
UM-UC-3人膀胱移行细胞癌
USMC大鼠血管平滑肌细胞
WERI-Rb-1人视网膜神经胶质瘤细胞
WI38/VA13SV-40Z转化肺成纤维细胞
WPMY-1人正常前列腺基质永生化细胞
Pt K1 (NBL-3)袋鼠肾细胞
293T/17人胚肾细胞
SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞
AE-1小鼠杂交瘤细胞(抗AChE)
AE-2小鼠杂交瘤细胞(抗AChE)
Super Tube狗肾细胞
SNU-1人胃癌细胞
A-204 [A204]人横纹肌肉瘤细胞
B95-8EB病毒转化的绒猴淋巴细胞
BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纤维细胞
CCC-SMC-1兔主动脉平滑肌细胞
MA-104罗猴胎肾细胞
PC-12(低分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)
PC-12(高分化)大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)
PED猪内皮细胞
RAMOS人B淋巴细胞瘤细胞
Reh人急性淋巴细胞白血病(非B非T)
SW837人结直肠腺癌上皮细胞
TE671 subline No.2人横纹肌肉瘤细胞
P69人前列腺上皮细胞
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