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苏州千舍生物教你如何培养细胞之细胞消化
发布时间:2020-03-12 点击量:171

苏州千舍生物教你如何培养细胞之细胞消化

细胞培养,尤其是细胞系的培养,就细胞消化而言,多做、善于总结,就可以把细胞养的越来越好

绝大部分细胞消化只要用胰酶润洗一遍即可:

吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。

怎样算是消化好了呢?

不需要把细胞全部消化成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了。

一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。

细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性,你可以尝试,准备100%的单个细胞悬液,贴壁后观察细胞,仍然是几个几个细胞聚集在一起。

一些悬浮培养细胞也是如此,容易聚集,不要过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液。细胞只要能从基质上脱离下来,即使是成片的(比如Calu-3细胞),吹打不超过20次(一般10次即可),成小规模聚集(10个细胞左右)是正常的,不要再去延长消化时间,等待单细胞悬液出现。

比较难消化的细胞:

润洗方法5min还不能消化,以结肠癌细胞为例,比如HCT15、LS411和KM12细胞,胰酶消化,一般10 cm 培养皿,一次最多加入300ul-500ul就足够了。即使这样难消化的细胞,一般不超过5min,即可见细胞成片移动,就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候,比如tsDC细胞,用胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙状移动。

常规的细胞实验,受消化影响不是很大:

如果不用胰酶去孵育而使用润洗的方法消化的话(难消化细胞例外)。但少数实验,比如病毒包装,对细胞代数,对细胞状态要求极高。这个时候,胰酶消化,就是润洗,都会对细胞包装病毒的能力有影响,传代次数一多,细胞包装能力就会逐渐下降。这个时候都不用胰酶消化,用一些盐溶液(不是EDTA液)即可。这些盐溶液通过影响细胞外基质相关酶的活性,来使得细胞脱离基质附着表面,但不切割任何蛋白。

EDTA的作用:

许多人不用胰酶,只用EDTA,或者用胰酶/EDTA联合作用。这里要明白,胰酶切割细胞外基质的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于整联蛋白的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA,就是这个道理。一般不要试图延长消化时间(如果10min还消化不彻底的话),而应该想其它办法。

PBS洗涤:

消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为血清中含有抑制胰酶的蛋白。对于一些难消化细胞,可以配制不含Ca,Mg离子的PBS,因为这些离子也会抑制胰酶的活性。但对于绝大部分细胞用胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化,不需要配制不含Ca,Mg离子的溶液。

每段时间定期对细胞房、培养箱&水盘、水浴锅、废液桶等容易染菌的个角落细菌、真菌等微生物的清除,每次操作完都整理好细胞房,带好手套、口罩、鞋套,防止人为因素污染。一旦发现污染,及时处理

Hyclone胎牛血清SH30084.03

Hyclone胎牛血清SH30406.02

Hyclone胎牛血清SH30406.05

Hyclone胎牛血清SH30396.03

Hyclone胎牛血清SH30070.03

特级胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖处理胎牛血清,热灭活 SH30068.03HI

马血清SH30074.03

乌拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

BOVOGEN胎牛血清 SFBS

BOVOGEN新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 优等胎牛血清FBS A15-151

BI优等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES级别胎牛血清 04-002-1A

BI 间充质胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES级别胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清Plus ST30-3302P

NTC优等胎牛血清 SFBE

Gemini优等胎牛血清 900-108

Gemini特级胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特级胎牛血清F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 无外泌体血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒装A31608-02、马血清16050-122

双抗15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐药株

HCT8/5-fu 人回肠直肠腺癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

LOVO/5-FU 人结肠癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

HCT116/L人结肠癌奥沙利铂耐药细胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病细胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌细胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人结肠癌细胞阿霉素耐药株

HNE1/DDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药株

SGC7901/5-fu人胃癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

A549/DDP人肺癌细胞顺铂耐药株

MCF-7/DDP人乳腺癌细胞顺铂耐药株

A549/ADR人肺癌细胞阿霉素耐药株

SGC7901/DDP人胃癌细胞顺铂耐药株

SKOV3/DDP人卵巢癌细胞顺铂耐药株

HELA/DDP人宫颈癌耐顺铂细胞株

NCI-H1650 人肺支气管癌细胞

RT4 人膀胱移行细胞乳头瘤

SK-N-MC 人神经上皮瘤细胞

SK-N-SH 人神经母细胞瘤细胞

SW982 人滑膜肉瘤细胞

T98G 人胶质母细胞瘤

U251MG(KO) 人类星形胶质细胞瘤细胞

U266 人骨髓瘤细胞

VCAP 人前列腺癌细胞

hTERT-HPNE 人胰腺导管细胞

ES-2 人卵巢透明细胞癌细胞

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞

H460 人大细胞肺癌细胞

HACAT 人永生化角质形成细胞

HCT116 人结肠癌细胞

HEK293 人胚肾细胞

HEPG2 人肝癌细胞

HGC27 人胃癌细胞(未分化)

HT-29 人结肠癌细胞

HUVEC 人脐静脉内皮细胞

KYSE150人食道癌细胞

L02(HL7702)人正常肝细胞  

LOVO 人结肠癌细胞

MCF-10A人正常乳腺上皮细胞

MCF7人乳腺癌细胞

LX-2 人肝星状细胞

MDA-MB-468人乳腺癌细胞

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