苏州千舍生物教你如何更好的培养细胞

在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题，这些问题从细胞生长角度来说，针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，我们做以下分析并提出相对应的解决方法。

一、培养细胞不贴壁

可能原因：

●胰蛋白酶消化过度 ；

●支原体污染 ；

●培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；               

●细胞老化 ；

●接种细胞起始浓度太低或太高 。

解决方法：

●缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；

●分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；

●使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2 ；

●启用新的保种细胞 ；

●调节zui佳接种细胞浓度。

二、悬浮细胞成簇

可能原因：

●培养液中含钙、镁离子 ；

●支原体污染；

●蛋白酶过度消化使得细胞裂解；

●DNA污染 。

解决方法：

●用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液；

●分离培养物，检测支原体；

●用DNaseI处理细胞。

三、培养细胞生长缓慢

可能原因：

●由于更换不同培养液或血清；

●培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏；

●培养物中有少量细菌或真菌污染；

●试剂保存不当；

●接种细胞起始浓度太低；

●细胞已老化；

●支原体污染 。

解决方法：

●比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液；

●换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子；

●用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物；

●血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清*培养液在2-8℃保存，需在1周内用完；

●增加接种细胞起始浓度；

●换用新的保种细胞；

●分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

四、培养细胞生长不好

可能原因：

●细胞本身的状态

细胞传代次数多，细胞老化；

细胞的接种量：接种量过低，细胞生长缓慢；

细胞传代时间过晚：细胞中毒，影响传代后的细胞生长；

胰酶消化时间过长或过短：时间过长，细胞死亡；时间过短，细胞未*分离而成团，细胞死亡；

细胞的冻存与复苏：慢冻速融。

●污染

支原体污染；

霉菌污染。

●培养基或血清

更换血清或培养基之前未进行验证；

选择的培养基是否合适；

培养基配制是否准确无误。

●培养环境

CO2供应是否正常；

培养箱或摇床温度控制是否正确。

解决方法：

根据以上四个方面的可能原因，做出针对性的解决方案

●注意细胞的本身状态：如传代次数、接种量等；

●避免产生污染（用正规、合法、可溯源的血清）；

●要用合适的血清或培养基，zui好经过验证；

●注意实验室的环境。

五、培养细胞死亡

可能原因：

●培养箱内无CO2；

●培养箱内温度波动太大；

●细胞冻存或复苏过程中损伤；

●培养液渗透压不正确；

●培养液中有毒代谢产物堆积 。

解决方法：

●检测培养箱内CO2；

●检查培养箱内温度；

●取新的保存细胞种；

●检测培养液渗透压；

●换入新鲜培养液。

Hyclone胎牛血清SH30084.03

Hyclone胎牛血清SH30406.02

Hyclone胎牛血清SH30406.05

Hyclone胎牛血清SH30396.03

Hyclone胎牛血清SH30070.03

特级胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖处理胎牛血清，热灭活 SH30068.03HI

马血清SH30074.03

乌拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

BOVOGEN胎牛血清 SFBS

BOVOGEN新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 优等胎牛血清FBS A15-151

BI优等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES级别胎牛血清 04-002-1A

BI 间充质胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES级别胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清Plus ST30-3302P

NTC优等胎牛血清 SFBE

Gemini优等胎牛血清 900-108

Gemini特级胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特级胎牛血清F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 无外泌体血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒装A31608-02、马血清16050-122

双抗15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐药株

HCT8/5-fu 人回肠直肠腺癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

LOVO/5-FU 人结肠癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

HCT116/L人结肠癌奥沙利铂耐药细胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病细胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌细胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人结肠癌细胞阿霉素耐药株

HNE1/DDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药株

SGC7901/5-fu人胃癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

A549/DDP人肺癌细胞顺铂耐药株

MCF-7/DDP人乳腺癌细胞顺铂耐药株

A549/ADR人肺癌细胞阿霉素耐药株

SGC7901/DDP人胃癌细胞顺铂耐药株

SKOV3/DDP人卵巢癌细胞顺铂耐药株

HELA/DDP人宫颈癌耐顺铂细胞株

NCI-H1650 人肺支气管癌细胞

RT4 人膀胱移行细胞乳头瘤

SK-N-MC 人神经上皮瘤细胞

SK-N-SH 人神经母细胞瘤细胞

SW982 人滑膜肉瘤细胞

T98G 人胶质母细胞瘤

U251MG(KO) 人类星形胶质细胞瘤细胞

U266 人骨髓瘤细胞

VCAP 人前列腺癌细胞

hTERT-HPNE 人胰腺导管细胞

ES-2 人卵巢透明细胞癌细胞

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞

H460 人大细胞肺癌细胞

HACAT 人永生化角质形成细胞

HCT116 人结肠癌细胞

HEK293 人胚肾细胞

HEPG2 人肝癌细胞

HGC27 人胃癌细胞(未分化)

HT-29 人结肠癌细胞

HUVEC 人脐静脉内皮细胞

KYSE150人食道癌细胞

L02(HL7702)人正常肝细胞  

LOVO 人结肠癌细胞

MCF-10A人正常乳腺上皮细胞

MCF7人乳腺癌细胞

LX-2 人肝星状细胞

MDA-MB-468人乳腺癌细胞