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豚鼠白介素4(IL-4)  ELISA试剂盒

豚鼠白介素4(IL-4) ELISA试剂盒

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所属分类:其他ELISA试剂盒

产品时间:2022-05-20

简要描述:豚鼠白介素4(IL-4) ELISA试剂盒Guinea Pig interleukin 4,IL-4 ELISA Kit
ELISA试剂盒 苏州千舍生物所有的elisa试剂盒均免费代测,您只需要将您准备好的样本邮寄到我告诉即可!本地也可以上门收取样本!全程Elisa实验技术指导,免费代做实验。老客户可享受优惠折扣服务!

详细说明:

豚鼠白介素4(IL-4)  ELISA试剂盒

英文:Guinea Pig interleukin 4,IL-4 ELISA Kit

规格:96T/48T

ELISA试剂盒又称为酶联免疫试剂盒,用于对液体样本中的目标物质进行定性和定量检测。随着国家对科研项目的重视,在科研单位和广大科研类院校也越来越受欢迎。
ELISA试剂盒的基本原理

(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;

(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;

(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。

由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一种既敏感又特异的方法。

特点

一、高效、灵敏、特异的抗体;二、稳定的重复性和可靠性;三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;五、节省实验经费。

制备方法

1)抗原表位的计算机筛选;2)抗原的制备;3)血清的采集;4)间接ELISA方法的建立;5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证;6)试剂盒的稳定性验证;7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。

样本类型

1、 血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。

2、 血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。3、 细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。4、 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。5、 保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂盒成分

1.预包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 96T

2.酶标记抗体: (30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化 0.4mL x 13.标准品: 重组小鼠白介素-6 0.5mL x 24.EIA缓冲液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 30mL x 15.标记抗体稀释液: 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 12mL x 16.显色剂: TMB底物液 15mL x 17.终止液: 1N硫酸 12mL x 18.浓缩洗涤液: (40倍浓缩) 含1% BSA, 0.05%吐温20 BPS 50mL x 1



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豚鼠白介素4(IL-4)  ELISA试剂盒 ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研生产中最为广泛最为灵敏的技术手段,有着十分重要的作用。操作步骤虽然看起来比较简单但是实验过程有很多的操作要点需要掌握,操作步骤中如果稍有不慎,操作不合理的地方,就会造成很多问题从而影响到ELISA试剂盒检测的准确性,大大降低试验质量。比如说花板,ELISA试剂盒假阳性,全显色,全部显色,显色比空白还低……这就需要我们在实验过程中多做总结,逐步完善,还有就是要多多学习,分享学习心得。下面就大体总结一下ELISA实验的常见问题和解决方法,同大家一起分享。

1、包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保存抗原很重要。还有有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法简要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、牢固,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。ELISA试剂盒②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。③小分子必须依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。

2、包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。应注意以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。具体的试验还要有坚固的理论外也要实践,看一下最终可不可以应用到自己试验当中去。人ELISA试剂盒常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8Tris-HCL缓冲液等等。

3、封闭:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有:0.05%-0.5%BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%;还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相似蛋白干扰)和酪蛋白等等。但最终选用什么,要依据试验具体来实践。

4、洗涤板:可以说在ELISA操作中,洗涤是最主要的关键技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。

5、加抗体标本(和二抗):注意该换枪头时换枪头。ELISA试剂盒标本稀释一般可用pbs稀释,也可用封闭液去稀释。如需加二抗,还要注意二抗的工作浓度,太高浪费,太低则着色浅。

6、显色:显色系统又很多,我们一开始做的时候,要选择适宜的显色系统。注意显色系统酶活性底物的保存HRP结合物加硫柳泵,AP结合物可加叠氮钠。

7、每次做尽量要把阴阳空三个对照做好,如出现问题也好分析。

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