猫p27核心抗原(P27)ELISA试剂盒
规格:96T/48T
英文:Cat p27 core antigen (P27) ELISA Kit
Elisa试剂盒原理
Elisa的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。进行检测时,样品中的受检物质(抗原或抗体)与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物,再加入酶标记的抗原或抗体,此时,能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色,根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量,进行定性或定量的分析。
ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。这种测定方法中有3种必要的试剂:(1) 固相的抗原或抗体;(2) 酶标记的抗原或抗体;(3) 酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状及检测的具备条件,有以下几种常用检测方法
双抗体夹心法测抗原
双抗体夹心法是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待测血清中的响应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后加酶标记抗体,与免疫复合物中的抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原的含量。
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竞争法
首先将特异性抗体包被于固相载体表面,经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,另一组只加酶标记抗原,经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。此方法测定的抗原只要有一个结合部位即可,对小分子抗原如激素和药物类的测定常用此法。
直接法
在直接Elisa中,抗原通过被动吸附直接固定在板的表面,并使用HRP标记的一抗进行检测。将无色底物引入样品,该底物与酶结合物反应,并产生可测量的副产物。根据底物的选择,该副产物可以是比色的,化学发光的或荧光的。信号产生的大小与样品中抗原的数量成正比。
间接Elisa本质上是直接ELISA的修改版本。在间接ELISA中,用于检测抗原的一抗是未偶联的。取而代之的是,对一抗的宿主物种具有反应性的酶标二级抗体被用于检测一抗-抗原复合物(间接检测抗原)。将无色底物引入样品,该底物与酶结合物反应,并产生可测量的副产物。根据底物的选择,该副产物可以是比色的,化学发光的或荧光的。信号产生的大小与样品中抗原的数量成正比。与直接ELISA相比,使用辅助检测试剂具有明显的优势,即信号放大。
Elisa试剂盒的组成
(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂);
(2)酶标记的抗原或抗体(结合物);
(3)酶的底物;
(4)对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中);
(5)结合物及标本的稀释液;
(6)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水;
(7)酶反应终止液。
Elisa试剂盒分类
细胞因子检测试剂盒
心肌梗塞检测试剂盒
内分泌检测试剂盒
肝纤维化检测试剂盒
自身免疫检测试剂盒
肿瘤标志物检测试剂盒
优育检测试剂盒
传染病检测试剂盒
特种蛋白检测试剂盒
样本处理
1血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
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