NCI-H1975+Osimertinib奥希替尼耐药肺腺癌细胞株技术说明
一、细胞株基本信息
细胞别称：NCI-H1975+Osimertinib、H1975奥希替尼耐药株
组织来源：人肺组织
疾病类型：人肺腺癌（非小细胞肺癌）
建株背景：该亲本NCI-H1975细胞株于1988年7月正式建株，细胞组织捐赠者为无吸烟史的肺腺癌患者。经持续梯度药物诱导培养，构建获得稳定奥希替尼耐药的NCI-H1975+Osimertinib耐药细胞株，广泛应用于非小细胞肺癌EGFR靶向药耐药机制研究、耐药逆转策略筛选、靶向药物药效评价等科研领域。
细胞形态：上皮细胞样，细胞轮廓清晰，胞体饱满，贴壁状态下形态规整，无明显异形肿大、空泡化等异常状态
生长特征：典型贴壁依赖性生长，细胞增殖状态稳定，传代后贴壁速率快，复苏存活率高，连续传代后耐药性状稳定，无明显消退现象
二、细胞STR鉴定信息（细胞身份质控）
本细胞株经STR基因分型鉴定，无交叉污染、无细胞系混杂，基因型特征稳定，可作为科研实验身份溯源依据，具体分型数据如下：
Amelogenin：X；CSF1PO：12；D13S317：10，13；D16S539：9，12；D18S51：13；D19S433：15，15.2；D21S11：28；D2S1338：17；D3S1358：14，15；D5S818：11，12；D7S820：8；D8S1179：13；FGA：21，24；TH01：7；TPOX：8，11；vWA：18
三、标准培养体系与条件
3.1 wan全培养基配方（耐药维持专用）
基础培养基：RPMI1640 wan全培养基
添加组分：10% 胎牛血清（FBS）、1% 青霉素-链霉素双抗、100 nM 奥希替尼（Osimertinib）
配方说明：10%胎牛血清为细胞增殖提供充足生长因子、蛋白及营养底物；1%双抗可有效抑制培养过程中细菌、真菌污染；100 nM奥希替尼为耐药株特异性维持药物，可稳定细胞耐药表型，防止耐药性状丢失，是维持细胞生物学特性的核心组分。
3.2 培养环境参数
气相环境：95% 空气 + 5% CO₂，维持培养基pH稳定，适配哺乳动物细胞呼吸代谢需求
培养温度：37℃，为细胞酶促反应、增殖分裂的最适温度
培养湿度：70%-80% 饱和湿度，有效防止培养基水分蒸发、渗透压失衡，保障细胞稳定生长
3.3 细胞增殖与传代规范
倍增与传代周期：细胞增殖速率稳定，常规每周传代2-3次，对数生长期细胞活力最佳，适合开展各类细胞实验
传代比例：标准1:2传代，可根据细胞汇合度微调，避免细胞过密老化或过稀生长停滞
消化操作标准：采用胰蛋白酶常规消化，消化时长控制在2-3分钟；消化期间可镜下观察细胞回缩、变圆、间隙增大状态，及时终止消化，避免过度消化损伤细胞膜，影响细胞活力与贴壁能力。
四、细胞复苏与驯化专项操作规范（核心关键）
本耐药细胞株运输及冻存初始培养液为无药物体系，收到细胞后需严格遵循梯度驯化流程，逐步恢复稳定耐药状态，保障实验可靠性，具体操作步骤如下：
1. 初始培养：收到细胞后，使用无奥希替尼的wan全培养基正常培养，持续1-2周，让细胞适应新培养环境、恢复增殖活力，消除运输应激损伤。
2. 梯度加药驯化：待细胞生长至40%-50%汇合度时，弃去无药培养基，更换含50 nM 奥希替尼的含药培养基继续培养；加药初期会出现少量细胞悬浮脱落，属于正常药物筛选现象，通过常规换液即可去除死细胞，留存存活耐药细胞。
3. 耐药稳态建立：待50 nM药物浓度培养的细胞长满培养瓶后，常规消化传代；连续传代1-2代后，将培养基奥希替尼浓度提升至标准维持浓度100 nM，持续培养即可稳定维持细胞耐药表型。
4. 实验前药物洗脱规范：若需开展细胞功能、药效检测、分子机制等正式实验，需提前至少1周更换为无药物正常培养基培养，洗脱药物残留，避免维持药物干扰实验数据，保证实验结果真实可信。
五、细胞冻存体系与保存规范
5.1 冻存液配方（两种可选）
配方一（经典体系）：90% 胎牛血清（FBS） + 10% DMSO（二甲基亚砜），血清浓度高，可大程度保护细胞活性，冻存复苏率高，适合长期保种
配方二（商业化体系）：专用非程序冻存液（货号JY-H040），操作便捷，无需手动梯度降温，适配常规实验室冻存条件
5.2 冻存核心禁忌
细胞冻存过程中，冻存液严禁添加奥希替尼药物，药物存在会影响细胞低温休眠状态，降低复苏存活率，破坏细胞固有生物学特性。
六、细胞生物学特性与科研应用价值
NCI-H1975亲本细胞携带EGFR T790M经典耐药突变，是第三代EGFR靶向药奥希替尼的经典耐受细胞模型。本改造后的NCI-H1975+Osimertinib细胞株，经长期药物筛选驯化，具备稳定的奥希替尼耐药特性，wan美模拟临床肺腺癌患者靶向治疗后获得性耐药病理状态。
该细胞株性状稳定、重复性好、无支原体及杂细胞污染，是研究肺腺癌EGFR靶向耐药机制、挖掘耐药关键靶点、研发耐药逆转新药、优化联合治疗方案的核心体外实验模型，适配细胞增殖、凋亡、迁移侵袭、基因表达、药物敏感性检测等各类分子生物学与肿瘤药理学实验。
七、质量控制与备注说明
1. 质量质控：细胞出库前均经过STR分型鉴定、支原体检测、细菌真菌污染检测、耐药稳定性验证，确保细胞身份纯正、活力优良、实验重复性达标。
2. 状态判定：加药培养初期少量细胞悬浮、脱落为正常筛选现象，无需丢弃整瓶细胞，持续换液培养即可获得稳定耐药细胞群。
3. 传代禁忌：严禁细胞高密度老化传代，汇合度超过90%易导致细胞活力下降、耐药性状不稳定，影响实验结果。
八、使用权限声明
本细胞株及配套技术资料仅用于生命科学基础研究、医学科研实验等学术研究用途，严禁用于动物活体治疗、人体临床疾病治疗、商业生产、医疗诊断等非科研场景，违规使用后果由使用者自行承担。
服务热线：15371470969
更新时间：2026-09-30
点击次数：17
当前位置：
