人胃癌紫杉醇耐药株AGS+Taxol培养说明

人胃癌紫杉醇耐药株AGS+Taxol培养说明

简介：The AGS细胞株源自一个未经治疗的切除肿瘤碎块。 在下述培养基中植板率为34%。 支原体感染后消除。

货号：WS-S1247

规格：1×10⁶ 细胞/T25 培养瓶

一、细胞基本信息

- 细胞来源：胃

- 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

-传代比例/细胞消化：1:2传代，消化2-3分钟。

- 倍增时间：每周2-3次

- 细胞含量：＞1×10⁶ 细胞/瓶

- 包装规格：T25 培养瓶 / 1mL 冻存管

- 产品用途：仅供科研使用，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

二、培养基与培养条件

1. 培养基

RPMI1640培养基；10%胎牛血清；50 nM Taxol；1%双抗

推荐血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培养条件

- 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

3. 冻存与储存

- 冻存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（现配现用）

- 储存条件：液氮长期保存

备注：收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 40-50%的汇合度时，去掉培养 液，加入含25nM Taxol药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换 液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，一两代之后可以将药物浓度提高到50 nM Taxol，含药培养液 用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。（注明：用不含药物培养基培养一周到两周， 再用含药培养基培养。） 如需进行实验，请提前至少1周更换为正常培养基培养。

三、运输形式与接收处理

1. 常温发货（T25 瓶活细胞）

收到细胞后，先对 T25 培养瓶瓶身进行表面消毒；将培养瓶放入培养箱静置 2 - 3 小时；观察细胞密度与生长状态，拍摄 2 - 3 张清晰照片反馈给销售；细胞密度达标即可进行传代，前期传代比例建议为 1:2；待细胞再次长满后，将其中一整瓶细胞冻存为 1 支 1mL 冻存管，另一瓶继续传代；建议反复冻存 2 - 3 支种子细胞后，再进行扩增实验，避免因突发情况导致细胞断种。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用于培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 T25 培养瓶按 1:2 传代。

2. 干冰发货（冻存管细胞）

常规发货为 2 支冻存管，建议复苏 1 支、留存 1 支备用；若支复苏失败，严格按照厂家标准复苏流程操作第二支；若两支均复苏失败，请立即留存复苏全过程照片，并时间通知销售处理。

四、细胞培养步骤

1.冻存细胞复苏

- 将 1mL 细胞悬液冻存管置于 37℃水浴，快速摇晃至解冻；

- 加入含 4 - 6mL 培养基的离心管中轻柔混匀；

- 1000RPM 离心 3 - 5 分钟，弃去上清液；

- 用培养基重悬细胞，接种至含 6 - 8mL 培养基的培养瓶/皿；

- 37℃培养过夜，次日在显微镜下观察细胞生长状态与密度。

2.对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：（细胞密度 80% - 90% 可传代）

- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培养箱中消化 1 - 2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

- 轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3 - 5min，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 - 1:5 的比例进行。

3.对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

- 注：次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自行决定。

- 方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

4.细胞冻存：收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

五、生物安全注意事项

1. 所有动物细胞均视为具有潜在生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，做好个人防护；所有废液及接触过细胞的器皿，需经灭菌处理后方可丢弃。

2. 复苏冻存细胞时，务必佩戴防护手套、防护服及防护面罩；冻存管浸没在液氮中可能发生泄漏并灌入液氮，解冻时液氮气化易导致容器爆裂、瓶盖崩飞造成人员划伤等伤害，操作时务必谨慎。

人源 WS-S14668 人非小细胞肺癌细胞顺铂耐药株PC-9-DDP

人源 WS-S1385 人卵巢癌细胞顺铂耐药株COC1+DDP

人源 WS-S1298 人卵巢癌细胞尼拉帕利SK-OV-3+Niraparib  (STR鉴定正确)

人源 WS-S1260 人结肠癌耐奥沙利铂耐药株HCT-116+Oxaliplatin

人源 WS-S1259 人肺腺癌耐奥希替尼耐药株NCI-H1975+Osimertinib

人源 WS-S1247 人胃癌紫杉醇耐药株AGS+Taxol

人源 WS-S1246 人胃癌奥沙利铂耐药株AGS+Oxaliplatin

人源 WS-S1245 人结肠癌耐5氟尿嘧啶耐药株HCT-116+5-Fluorouracil

人源 WS1134 非洲绿猴肾细胞耐顺铂VEROC1008(E6)+DDP

人源 WS1133 小鼠肺癌细胞奥希替尼耐药株LLC+Osimertinib

人源 WS1069 人非小细胞肺癌奥希替尼耐药株HCC-827+Osimertinib

人源 WS1068 人非小细胞肺癌奥希替尼耐药株PC-9+Osimertinib

人源 WS1067 人卵巢癌耐紫杉醇耐药株A2780+Taxol

人源 WS1061 人宫颈癌细胞顺铂耐药株C33A+DDP

人源 WS1054 人肝癌亚力山大耐索拉非尼耐药细胞PLC/PRF/5+sorafensh

人源 WS1053 人膀胱癌吉西他滨耐药株5637/G

人源 WS1052 人前列腺癌多西他赛耐药株DU-145+Docetaxel

人源 WS1051 人宫颈癌紫杉醇耐药株Hela+Taxol

人源 WS1050 人胰腺癌吉西他滨耐药株MIA-PACA-2/G

人源 WS1049 人胰腺癌吉西他滨耐药株SW1990/G

人源 WS1048 人结肠癌奥沙利铂耐药株HCT-8+Oxaliplatin

人源 WS1047 人结肠癌紫杉醇耐药株HCT-8+Taxol

人源 WS-Q2009 人结直肠腺癌细胞长春新碱耐药株HCT-8/V

人源 WS-Q1156 人膀胱癌耐顺铂细胞株T24+DDP(STR鉴定正确)

人源 WS-Q1155 人卵巢癌顺铂耐药株A2780+DDP

人源 WS924 肺癌紫杉醇耐药株A549+Taxol

人源 WS918 人舌鳞癌顺铂耐药株CAL 27+DDP

人源 WS901 人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株LOVO+5FU

人源 WS900 人结肠癌紫杉醇耐药株HCT-15+Taxol

人源 WS844 人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株HCT-15+5FU

人源 WS816 人大细胞肺癌顺铂耐药株NCI-H460/cis

人源 WS810 人卵巢癌腺癌阿霉素耐药细胞OVCAR-8/ADR

人源 WS789 人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株ASPC-1/GEM

人源 WS761 人卵巢癌顺铂耐药株SKOV3/DDP

人源 WS721 人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7+adr

人源 WS707 人胃癌顺铂耐药株 AGS/DDP

人源 WS687 人胃癌顺铂耐药株SGC7901/DDP

人源 WS370 人白血病阿霉素耐药株K562/ADR

人源 WS338 吉非替尼耐药PC-9GR

人源 WS107 人肺癌细胞/5Fu耐药株A549-5Fu

人源 WS053 人肺腺癌耐顺铂株A549/DDP