人卵巢癌细胞尼拉帕利SK-OV-3+Niraparib 培养说明

人卵巢癌细胞尼拉帕利SK-OV-3+Niraparib 培养说明

简介：SK-OV-3由G.Trempe和L.J.Old在1973年从卵巢肿瘤病人的腹水分离得到此细胞对肿瘤坏死因子和几种细胞毒性药物包括白喉毒素、顺铂和阿霉素均耐受。在裸鼠中致瘤，且形成与卵巢原位癌一致的中度分化的腺癌。

货号：WS-S1298

规格：1×10⁶ 细胞/T25 培养瓶

一、细胞基本信息

- 细胞来源：卵巢；腹水转移

- 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

-传代比例/细胞消化：1:2传代，消化2-3分钟。

- 倍增时间：每周2-3次

- 细胞含量：＞1×10⁶ 细胞/瓶

- 包装规格：T25 培养瓶 / 1mL 冻存管

- 产品用途：仅供科研使用，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

二、培养基与培养条件

1. 培养基

McCoy’s 5A培养基；10%胎牛血清；5uM Niraparib；1%双抗

推荐血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培养条件

- 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

3. 冻存与储存

- 冻存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（现配现用）

- 储存条件：液氮长期保存

备注：收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到 40-50%的汇合度时，去掉培养液，加入含2.5uM Niraparibb药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，一两代之后可以将药物浓度提高到5uM Niraparib，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。（注明：用不含药物培养基培养一周到两周，再用含药培养基培养。）如需进行实验，请提前至少1周更换为正常培养基培养。

三、运输形式与接收处理

1. 常温发货（T25 瓶活细胞）

收到细胞后，先对 T25 培养瓶瓶身进行表面消毒；将培养瓶放入培养箱静置 2 - 3 小时；观察细胞密度与生长状态，拍摄 2 - 3 张清晰照片反馈给销售；细胞密度达标即可进行传代，前期传代比例建议为 1:2；待细胞再次长满后，将其中一整瓶细胞冻存为 1 支 1mL 冻存管，另一瓶继续传代；建议反复冻存 2 - 3 支种子细胞后，再进行扩增实验，避免因突发情况导致细胞断种。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用于培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 T25 培养瓶按 1:2 传代。

2. 干冰发货（冻存管细胞）

常规发货为 2 支冻存管，建议复苏 1 支、留存 1 支备用；若支复苏失败，严格按照厂家标准复苏流程操作第二支；若两支均复苏失败，请立即留存复苏全过程照片，并时间通知销售处理。

四、细胞培养步骤

1.冻存细胞复苏

- 将 1mL 细胞悬液冻存管置于 37℃水浴，快速摇晃至解冻；

- 加入含 4 - 6mL 培养基的离心管中轻柔混匀；

- 1000RPM 离心 3 - 5 分钟，弃去上清液；

- 用培养基重悬细胞，接种至含 6 - 8mL 培养基的培养瓶/皿；

- 37℃培养过夜，次日在显微镜下观察细胞生长状态与密度。

2.对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：（细胞密度 80% - 90% 可传代）

- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培养箱中消化 1 - 2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

- 轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3 - 5min，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 - 1:5 的比例进行。

3.对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

- 注：次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自行决定。

- 方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

4.细胞冻存：收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

五、生物安全注意事项

1. 所有动物细胞均视为具有潜在生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，做好个人防护；所有废液及接触过细胞的器皿，需经灭菌处理后方可丢弃。

2. 复苏冻存细胞时，务必佩戴防护手套、防护服及防护面罩；冻存管浸没在液氮中可能发生泄漏并灌入液氮，解冻时液氮气化易导致容器爆裂、瓶盖崩飞造成人员划伤等伤害，操作时务必谨慎。

人源 WS-S14668 人非小细胞肺癌细胞顺铂耐药株PC-9-DDP

人源 WS-S1385 人卵巢癌细胞顺铂耐药株COC1+DDP

人源 WS-S1298 人卵巢癌细胞尼拉帕利SK-OV-3+Niraparib  (STR鉴定正确)

人源 WS-S1260 人结肠癌耐奥沙利铂耐药株HCT-116+Oxaliplatin

人源 WS-S1259 人肺腺癌耐奥希替尼耐药株NCI-H1975+Osimertinib

人源 WS-S1247 人胃癌紫杉醇耐药株AGS+Taxol

人源 WS-S1246 人胃癌奥沙利铂耐药株AGS+Oxaliplatin

人源 WS-S1245 人结肠癌耐5氟尿嘧啶耐药株HCT-116+5-Fluorouracil

人源 WS1134 非洲绿猴肾细胞耐顺铂VEROC1008(E6)+DDP

人源 WS1133 小鼠肺癌细胞奥希替尼耐药株LLC+Osimertinib

人源 WS1069 人非小细胞肺癌奥希替尼耐药株HCC-827+Osimertinib

人源 WS1068 人非小细胞肺癌奥希替尼耐药株PC-9+Osimertinib

人源 WS1067 人卵巢癌耐紫杉醇耐药株A2780+Taxol

人源 WS1061 人宫颈癌细胞顺铂耐药株C33A+DDP

人源 WS1054 人肝癌亚力山大耐索拉非尼耐药细胞PLC/PRF/5+sorafensh

人源 WS1053 人膀胱癌吉西他滨耐药株5637/G

人源 WS1052 人前列腺癌多西他赛耐药株DU-145+Docetaxel

人源 WS1051 人宫颈癌紫杉醇耐药株Hela+Taxol

人源 WS1050 人胰腺癌吉西他滨耐药株MIA-PACA-2/G

人源 WS1049 人胰腺癌吉西他滨耐药株SW1990/G

人源 WS1048 人结肠癌奥沙利铂耐药株HCT-8+Oxaliplatin

人源 WS1047 人结肠癌紫杉醇耐药株HCT-8+Taxol

人源 WS-Q2009 人结直肠腺癌细胞长春新碱耐药株HCT-8/V

人源 WS-Q1156 人膀胱癌耐顺铂细胞株T24+DDP(STR鉴定正确)

人源 WS-Q1155 人卵巢癌顺铂耐药株A2780+DDP

人源 WS924 肺癌紫杉醇耐药株A549+Taxol

人源 WS918 人舌鳞癌顺铂耐药株CAL 27+DDP

人源 WS901 人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株LOVO+5FU

人源 WS900 人结肠癌紫杉醇耐药株HCT-15+Taxol

人源 WS844 人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株HCT-15+5FU

人源 WS816 人大细胞肺癌顺铂耐药株NCI-H460/cis

人源 WS810 人卵巢癌腺癌阿霉素耐药细胞OVCAR-8/ADR

人源 WS789 人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株ASPC-1/GEM

人源 WS761 人卵巢癌顺铂耐药株SKOV3/DDP

人源 WS721 人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7+adr

人源 WS707 人胃癌顺铂耐药株 AGS/DDP

人源 WS687 人胃癌顺铂耐药株SGC7901/DDP

人源 WS370 人白血病阿霉素耐药株K562/ADR

人源 WS338 吉非替尼耐药PC-9GR

人源 WS107 人肺癌细胞/5Fu耐药株A549-5Fu

人源 WS053 人肺腺癌耐顺铂株A549/DDP