小鼠主动脉内皮细胞永生化培养说明

小鼠主动脉内皮细胞永生化培养说明

简介：小鼠主动脉内皮细胞分离自主动脉组织；主动脉内皮细胞（aortic endothelial cells）组成了主动脉内壁，并持续受到血流剪切应力的影响。内皮细胞在切应力的作用下，分泌不同的内皮因子并进而影响血管收缩和生长。主动脉内皮细胞也调节细胞黏附分子的表达来控制和精确调节炎症反应和组织纤维化。体外培养的原代主动脉内皮细胞可有效地帮助研究者研究内皮功能失调的机理，动脉粥样化等疾病的发病机理以及发展新的治疗方法。

货号：WS-Q2019

规格：1×10⁶ 细胞/T25 培养瓶

一、细胞基本信息

- 细胞来源：小鼠主动脉组织

- 细胞形态：上皮细胞样，多角形细胞样 ，贴壁生长

-传代比例/细胞消化：1:2传代

- 倍增时间：每周2-3次

- 细胞含量：＞1×10⁶ 细胞/瓶

- 包装规格：T25 培养瓶 / 1mL 冻存管

- 产品用途：仅供科研使用，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

二、培养基与培养条件

1. 培养基

基础培养基500ml；生长添加剂5ml；胎牛血清25ml；双抗5ml

推荐血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培养条件

- 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

3. 冻存与储存

- 冻存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（现配现用）

- 储存条件：液氮长期保存

三、运输形式与接收处理

1. 常温发货（T25 瓶活细胞）

收到细胞后，先对 T25 培养瓶瓶身进行表面消毒；将培养瓶放入培养箱静置 2 - 3 小时；观察细胞密度与生长状态，拍摄 2 - 3 张清晰照片反馈给销售；细胞密度达标即可进行传代，前期传代比例建议为 1:2；待细胞再次长满后，将其中一整瓶细胞冻存为 1 支 1mL 冻存管，另一瓶继续传代；建议反复冻存 2 - 3 支种子细胞后，再进行扩增实验，避免因突发情况导致细胞断种。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用于培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 T25 培养瓶按 1:2 传代。

2. 干冰发货（冻存管细胞）

常规发货为 2 支冻存管，建议复苏 1 支、留存 1 支备用；若支复苏失败，严格按照厂家标准复苏流程操作第二支；若两支均复苏失败，请立即留存复苏全过程照片，并时间通知销售处理。

四、细胞培养步骤

1.冻存细胞复苏

- 将 1mL 细胞悬液冻存管置于 37℃水浴，快速摇晃至解冻；

- 加入含 4 - 6mL 培养基的离心管中轻柔混匀；

- 1000RPM 离心 3 - 5 分钟，弃去上清液；

- 用培养基重悬细胞，接种至含 6 - 8mL 培养基的培养瓶/皿；

- 37℃培养过夜，次日在显微镜下观察细胞生长状态与密度。

2.对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：（细胞密度 80% - 90% 可传代）

- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培养箱中消化 1 - 2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

- 轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3 - 5min，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 - 1:5 的比例进行。

3.对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

- 注：次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自行决定。

- 方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

4.细胞冻存：收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

五、生物安全注意事项

1. 所有动物细胞均视为具有潜在生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，做好个人防护；所有废液及接触过细胞的器皿，需经灭菌处理后方可丢弃。

2. 复苏冻存细胞时，务必佩戴防护手套、防护服及防护面罩；冻存管浸没在液氮中可能发生泄漏并灌入液氮，解冻时液氮气化易导致容器爆裂、瓶盖崩飞造成人员划伤等伤害，操作时务必谨慎。

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