人骨肉瘤细胞带红色荧光143B+RFP培养说明书

人骨肉瘤细胞带红色荧光143B+RFP培养说明书

简介：胸苷激酶阴性(TK-)。这是一个人骨肉瘤细胞系。

货号：WS982

规格：1×10⁶ 细胞/T25 培养瓶

一、细胞基本信息

- 细胞来源：骨

- 细胞形态：混合型、上皮和成纤维细胞样，贴壁生长

- 传代比例/细胞消化：1:2传代，消化1-2分钟

- 倍增时间：每周 2-3次

- 细胞含量：＞1×10⁶ 细胞/瓶

- 包装规格：T25 培养瓶 / 1mL 冻存管

- 产品用途：仅供科研使用，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

二、培养基与培养条件

1. 培养基

MEM培养基；10%胎牛血清；0.015mg/ml 5-溴-2-脱氧尿苷；1%双抗

推荐血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培养条件

- 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

3. 冻存与储存

- 冻存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（现配现用）

- 储存条件：液氮长期保存

三、运输形式与接收处理

1. 常温发货（T25 瓶活细胞）

收到细胞后，先对 T25 培养瓶瓶身进行表面消毒；将培养瓶放入培养箱静置 2 - 3 小时；观察细胞密度与生长状态，拍摄 2 - 3 张清晰照片反馈给销售；细胞密度达标即可进行传代，前期传代比例建议为 1:2；待细胞再次长满后，将其中一整瓶细胞冻存为 1 支 1mL 冻存管，另一瓶继续传代；建议反复冻存 2 - 3 支种子细胞后，再进行扩增实验，避免因突发情况导致细胞断种。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用于培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 T25 培养瓶按 1:2 传代。

2. 干冰发货（冻存管细胞）

常规发货为 2 支冻存管，建议复苏 1 支、留存 1 支备用；若支复苏失败，严格按照厂家标准复苏流程操作第二支；若两支均复苏失败，请立即留存复苏全过程照片，并时间通知销售处理。

四、细胞培养步骤

1.冻存细胞复苏

- 将 1mL 细胞悬液冻存管置于 37℃水浴，快速摇晃至解冻；

- 加入含 4 - 6mL 培养基的离心管中轻柔混匀；

- 1000RPM 离心 3 - 5 分钟，弃去上清液；

- 用培养基重悬细胞，接种至含 6 - 8mL 培养基的培养瓶/皿；

- 37℃培养过夜，次日在显微镜下观察细胞生长状态与密度。

2.对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：（细胞密度 80% - 90% 可传代）

- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培养箱中消化 1 - 2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

- 轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3 - 5min，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 - 1:5 的比例进行。

3.对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

- 注：次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自行决定。

- 方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

4.细胞冻存：收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

五、生物安全注意事项

1. 所有动物细胞均视为具有潜在生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，做好个人防护；所有废液及接触过细胞的器皿，需经灭菌处理后方可丢弃。

2. 复苏冻存细胞时，务必佩戴防护手套、防护服及防护面罩；冻存管浸没在液氮中可能发生泄漏并灌入液氮，解冻时液氮气化易导致容器爆裂、瓶盖崩飞造成人员划伤等伤害，操作时务必谨慎。

人骨髓增生异常综合征细胞MDS-L

人乳腺癌细胞MX-1

人卵巢上皮性肿瘤细胞OAW-28

人阴道上皮细胞VK2/E6E7

人乳腺导管癌细胞HCC1500

人子宫鳞癌细胞(高分化)HCC-94

人喉癌细胞AMC-HN-8

人鼻咽癌细胞HNE1

人喉癌细胞TU138

人结直肠腺癌细胞SNU-C5

人肝癌细胞亚型GS-HEPG2

人小肠上皮细胞FHs 74 Int

人正常肝细胞QSG-7701

人肺癌鳞癌细胞EBC-1

人非小细胞肺癌腺癌细胞NCI-H1993

人胰腺癌细胞KP4

人大细胞肺癌LCLC97TM1

人大细胞肺癌LCLC103H

人非小细胞肺癌腺癌细胞NCI-H2291

人舌鳞癌细胞WSU-HN6

人肝癌细胞系HepAD38

人高分化脂肪肉瘤细胞93T449

人黑色素瘤细胞HMCB

人结肠癌细胞SW403

人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞HFLS-RA

人前列腺癌细胞C4-2B

人胶质母细胞瘤细胞系SF188

人胚肾细胞Lenti-X293T

人神经母细胞瘤细胞 NB1

人慢性粒白血病细胞HAP1

人肺巨细胞癌细胞(低转移)95C（PLA801C）

人肺癌鳞癌细胞LUDLU-1

人逆转录病毒包装细胞系Plat A

人结直肠腺癌细胞SK-CO-1

人脑部多形性成釉细胞瘤细胞KNS-42

人舌鳞癌细胞WSU-HN

人非小细胞肺癌细胞NCIH1155

人乳腺癌细胞HDQ-P1

人肺癌腺癌细胞NCI-H1648

人肺癌细胞NCI-H1793

人白血病细胞NOMO-1

人肺腺癌细胞NCI-H1693

人星形胶质细胞瘤Marcus

人肺腺癌细胞NCI-H3255

人胃癌细胞OCUM-1

人胃腺癌细胞IM-95M

人肺癌细胞ChaGo-K-1

人肺癌细胞NCI-H69AR

人甲状腺癌细胞FTC-133  

人肺癌细胞转染A549+OVA