猪肾细胞 PK-15培养说明

猪肾细胞 PK-15

细胞介绍

从分离自新生的未阉割的猪的空肠的正常肠上皮细胞建立，该细胞系携带猪C型肿瘤病毒(PCOV)序列及其转录物，分别通过PCR和RT-PCR检测。我们没有确定这些病毒的感染方式，也不能排除病毒的分泌。在德国，这些病毒被分类为与人有关的BSL 1和与动物有关的BSL 2(TRBA 462)。然而，德国中央生物安全委员会(ZKBS)将这些病毒和受感染的细胞系BSL 2归类为用于基因改造应用(参考文献1。6790-10-65).

细胞特性

1） 来源：猪  肠(空肠)

2） 形态：上皮细胞样  贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

三、 细胞传代操作步骤

A. 贴壁细胞传代

1. 准备：吸弃旧培养基。

2. 冲洗：沿培养瓶侧壁缓慢加入PBS等冲洗液，轻轻晃动后吸弃，去除残留血清。

3. 消化：加入预热的胰酶（如T25加1ml），轻轻晃动使胰酶覆盖所有细胞。

4. 孵育：室温消化约2分钟（时间因细胞而异）。

5. 观察：在显微镜下观察，直至≥90% 细胞变圆、脱落。若未达到，可每30秒检查一次。

6. 终止：当细胞充分解离后，立即加入两倍胰酶体积的预热的wan全培养基终止消化。

7. 吹打：用移液器轻轻吹打瓶壁，使细胞wan全脱落并分散成单细胞悬液。

8. 离心：将细胞悬液转移至离心管，200 × g 离心 3-5分钟，弃上清。

9. 重悬与接种：用少量新鲜wan全培养基重悬细胞沉淀，按适当比例稀释后，接种到新的培养瓶中。

10. 培养：放入培养箱。若使用普通瓶盖，务必旋松瓶盖以利气体交换。

B. 悬浮细胞传代

1. 收集与离心：将细胞悬液全部转移至离心管，1000 rpm 离心 5分钟，弃上清。

2. 重悬：加入1-2ml新鲜wan全培养基，轻柔重悬细胞。

3. 接种：按1:2的比例将细胞悬液传至新T25培养瓶，并补充总培养基量至5-8ml。

4. 培养：放入培养箱继续培养。

四、 特殊问题处理：运输中脱落的贴壁细胞

部分贴壁不牢的细胞在运输中会脱落，属正常现象，按以下步骤处理：

1. 收集：将瓶内所有培养基转入无菌离心管，离心（1200rpm, 3-5min）弃上清。

2. 清洗：用PBS重悬细胞，再次离心（1200rpm, 3-5min）弃去PBS。

3. 消化：加入约1ml 0.25%胰酶，轻柔混匀（勿剧烈吹打），放入培养箱消化1-2分钟。

4. 终止与分散：取出后轻轻吹打使细胞团分散，迅速加入3-5mlwan全培养基终止消化，离心（1200rpm, 3-5min）弃上清。

5. 重悬与接种：加入5mlwan全培养基重悬，按比例接种到新培养瓶/皿中。

6. 观察：镜下观察。若细胞为单颗或仅有3-5个细胞的小团，可正常培养，待其贴壁生长。--细胞凋亡的早期形态学改变是核染色质浓聚、固缩,聚集在核膜周边，然后是胞浆浓缩、胞膜起泡,继而细胞核裂解成若干碎片，细胞膜将胞质和染色质断片包裹，胞浆内形成多个膜结构尚完整的“小泡"及 “凋亡小体" (apoptoticbody)。这不同于细胞坏死的细胞肿胀、胞膜破裂、细胞崩解。

       根据凋亡细胞固有的形态特征，至今为止，已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。

流式细胞技术

     流式细胞仪检测凋亡细胞是通过检查其光射特征及荧光参数时行的。细胞穿过流式细胞仪的激光束集点时使激光发生散射，分析散射光可以提供细胞大小及结构的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光两种，前向散射光的强度与细胞大小、体积相产，右向角射光的强度与细胞结构的析射性、颗粒性（granu-larity）有关。

     细胞凋亡过程中出现的形态改变如细胞皱缩、胞膜起泡、核浓缩和碎裂等可以使光散射特性发生改变。早期凋亡细胞主要表现为前向散射光减弱而右向角散射光增强或不变，前者反映了细胞的皱缩，后者反映了细胞的核逐缩及碎裂。晚期凋亡细胞的前向散射光和右向角散射光均减弱。

     由于光散射牧场生并非凋亡细胞的特异性指标，细胞的机械性损伤和细胞坏死也可以使前向散射光减弱。因此，只有将光散射特性的检测与荧光参数的检测结合起来才能准确地辨认凋亡细胞。

     细胞凋亡过程中核酸内切酶在DNA分子核小体间的降解，导致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，细胞荧光染色后作流式细胞仪分析，可以发现在DNA直方图上正常二倍体细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡细胞。

    根据此亚二倍体峰可以计算凋亡细胞的百分率。此外，流式细胞术还可以通过测定线粒体膜的电位、溶酶体质子泵的活性及细胞DNA/总蛋白质比例等方法辨认凋亡细胞。

检测方法：获取密度1×106细胞/ml左右的细胞悬液，精洗，固定，荧光染料染色，上流式细胞仪分析。

猪肾细胞 PK-15

小鼠神经干细胞 NE-4C

小鼠胰岛β细胞株 Min6

小鼠B细胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌细胞 Hepa1-6

小鼠小胶质细胞 Bv-2

小鼠乳腺癌细胞 4T1

小鼠胚胎瘤细胞 ATDC5

小鼠胰腺癌细胞 PANC02

小鼠胶质瘤细胞 GL261

小鼠肺癌细胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨细胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌细胞 EMT6

小鼠海马神经元细胞 HT22

小鼠小肠内分泌细胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮细胞 EpH4-Ev

小鼠肝细胞 AML12

小鼠膀胱癌细胞 MB49

小鼠巨噬细胞 Ana-1

小鼠肾小球系膜细胞 SV40-MES-13

小鼠胚胎肝细胞 BNLCL.2

小鼠肥大细胞瘤细胞 P815

小鼠肾癌细胞 Renca

小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株 G422

小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0

小鼠精原细胞系 GC-1spg

小鼠肾髓质细胞 mIMCD-3

小鼠前列腺癌细胞 RM-1

小鼠宫颈癌细胞 U14

小鼠卵巢癌细胞 ID8

小鼠皮下结缔组织细胞 L-WRN

小鼠胰腺腺泡癌细胞 266-6

小鼠骨髓基质细胞　 OP9

小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 MC3T3-E1

人子宫颈表皮癌细胞MS751 MS751

小鼠肝癌 H22

小鼠淋巴瘤细胞 EL4

小鼠骨样细胞 MLO-Y4

小鼠胰岛内皮细胞 MS1

猪肾传代细胞 IBRS-2

恒河猴胚肾细胞 FRHK-4

恒河猴肾细胞 LLC-MK2

昆虫卵巢细胞 Sf9

科研C6/36白纹伊蚊细胞 C6/36

猴脉络膜-视网膜内皮细胞 RF/6A

鸡肝癌细胞 LMH

仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21

非洲绿猴肾细胞 VEROC1008(E6)

猪肾细胞系 PK15

牛肾细胞 MDBK

非洲绿猴肾细胞 VERO

猪睾丸细胞系 ST

猫肾细胞 CRFK

犬肾细胞 MDCK-II

恒河猴肾细胞MA-104 MA-104

绒猴EBV转化的白细胞 B120-8

猪内皮细胞PED PED

中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1

鸡胚胎成纤维细胞 UMNSAH/DF-1

中国仓鼠肺细胞CHL CHL

仓鼠肺细胞 V79

猪肺泡巨噬细胞 3D4/21

中国仓鼠卵巢细胞 CHO

鸡淋巴瘤细胞 DT40

猴肾细胞 MARC145

鸭子胚胎成纤维细胞 Duckembryo

中国仓鼠卵巢细胞(悬浮 CHO-S

果蝇胚胎细胞S2 S2

猪肠上皮细胞 IPEC-J2

 猪鼻甲黏膜成纤维细胞 PT-K75

猪肺泡巨噬细胞 3D4/21

 猪肾细胞 PK-15