猪鼻甲黏膜成纤维细胞PT-K75操作说明

猪鼻甲黏膜成纤维细胞PT-K75

细胞介绍

克隆Neuro-2A是由R.J.Klebe和F.H.Ruddle经A株白鼠的自生肿瘤建立。该细胞产生大量微管蛋白，此蛋白在神经细胞中起应答轴浆流动的收缩系统作用。

细胞特性

1） 来源：脑神经母细胞瘤

2） 形态：阿米巴样干细胞

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

冻存细胞的复苏：：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

细胞凋亡的早期形态学改变是核染色质浓聚、固缩,聚集在核膜周边，然后是胞浆浓缩、胞膜起泡,继而细胞核裂解成若干碎片，细胞膜将胞质和染色质断片包裹，胞浆内形成多个膜结构尚完整的“小泡"及 “凋亡小体" (apoptoticbody)。这不同于细胞坏死的细胞肿胀、胞膜破裂、细胞崩解。

       根据凋亡细胞固有的形态特征，至今为止，已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。

流式细胞技术

     流式细胞仪检测凋亡细胞是通过检查其光射特征及荧光参数时行的。细胞穿过流式细胞仪的激光束集点时使激光发生散射，分析散射光可以提供细胞大小及结构的信息。散射光包括前向散射光和左向角散射光两种，前向散射光的强度与细胞大小、体积相产，右向角射光的强度与细胞结构的析射性、颗粒性（granu-larity）有关。

     细胞凋亡过程中出现的形态改变如细胞皱缩、胞膜起泡、核浓缩和碎裂等可以使光散射特性发生改变。早期凋亡细胞主要表现为前向散射光减弱而右向角散射光增强或不变，前者反映了细胞的皱缩，后者反映了细胞的核逐缩及碎裂。晚期凋亡细胞的前向散射光和右向角散射光均减弱。

     由于光散射牧场生并非凋亡细胞的特异性指标，细胞的机械性损伤和细胞坏死也可以使前向散射光减弱。因此，只有将光散射特性的检测与荧光参数的检测结合起来才能准确地辨认凋亡细胞。

     细胞凋亡过程中核酸内切酶在DNA分子核小体间的降解，导致小分子DNA漏出，核DNA含量下降，细胞荧光染色后作流式细胞仪分析，可以发现在DNA直方图上正常二倍体细胞的Go/G1峰前出现一个亚二倍体峰（xub-G1峰，即AP峰--apoptotic peak）,代表凋亡细胞。

    根据此亚二倍体峰可以计算凋亡细胞的百分率。此外，流式细胞术还可以通过测定线粒体膜的电位、溶酶体质子泵的活性及细胞DNA/总蛋白质比例等方法辨认凋亡细胞。

检测方法：获取密度1×106细胞/ml左右的细胞悬液，精洗，固定，荧光染料染色，上流式细胞仪分析。

猪鼻甲黏膜成纤维细胞PT-K75

小鼠神经干细胞 NE-4C

小鼠胰岛β细胞株 Min6

小鼠B细胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌细胞 Hepa1-6

小鼠小胶质细胞 Bv-2

小鼠乳腺癌细胞 4T1

小鼠胚胎瘤细胞 ATDC5

小鼠胰腺癌细胞 PANC02

小鼠胶质瘤细胞 GL261

小鼠肺癌细胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨细胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌细胞 EMT6

小鼠海马神经元细胞 HT22

小鼠小肠内分泌细胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮细胞 EpH4-Ev

小鼠肝细胞 AML12

小鼠膀胱癌细胞 MB49

小鼠巨噬细胞 Ana-1

小鼠肾小球系膜细胞 SV40-MES-13

小鼠胚胎肝细胞 BNLCL.2

小鼠肥大细胞瘤细胞 P815

小鼠肾癌细胞 Renca

小鼠脑神经胶质母细胞瘤瘤株 G422

小鼠骨髓瘤细胞 SP2/0

小鼠精原细胞系 GC-1spg

小鼠肾髓质细胞 mIMCD-3

小鼠前列腺癌细胞 RM-1

小鼠宫颈癌细胞 U14

小鼠卵巢癌细胞 ID8

小鼠皮下结缔组织细胞 L-WRN

小鼠胰腺腺泡癌细胞 266-6

小鼠骨髓基质细胞　 OP9

小鼠胚胎成骨细胞前体细胞 MC3T3-E1

人子宫颈表皮癌细胞MS751 MS751

小鼠肝癌 H22

小鼠淋巴瘤细胞 EL4

小鼠骨样细胞 MLO-Y4

小鼠胰岛内皮细胞 MS1

猪肾传代细胞 IBRS-2

恒河猴胚肾细胞 FRHK-4

恒河猴肾细胞 LLC-MK2

昆虫卵巢细胞 Sf9

科研C6/36白纹伊蚊细胞 C6/36

猴脉络膜-视网膜内皮细胞 RF/6A

鸡肝癌细胞 LMH

仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21

非洲绿猴肾细胞 VEROC1008(E6)

猪肾细胞系 PK15

牛肾细胞 MDBK

非洲绿猴肾细胞 VERO

猪睾丸细胞系 ST

猫肾细胞 CRFK

犬肾细胞 MDCK-II

恒河猴肾细胞MA-104 MA-104

绒猴EBV转化的白细胞 B120-8

猪内皮细胞PED PED

中国仓鼠卵巢细胞 CHO-K1

鸡胚胎成纤维细胞 UMNSAH/DF-1

中国仓鼠肺细胞CHL CHL

仓鼠肺细胞 V79

猪肺泡巨噬细胞 3D4/21

中国仓鼠卵巢细胞 CHO

鸡淋巴瘤细胞 DT40

猴肾细胞 MARC145

鸭子胚胎成纤维细胞 Duckembryo

中国仓鼠卵巢细胞(悬浮 CHO-S

果蝇胚胎细胞S2 S2

猪肠上皮细胞 IPEC-J2

 猪鼻甲黏膜成纤维细胞 PT-K75

猪肺泡巨噬细胞 3D4/21

 猪肾细胞 PK-15