ASPC-1/GEM 人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株

ASPC-1/GEM 人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株   

一个胰腺癌病人的腹水中的细胞移植到裸鼠后建立了这个细胞株。

细胞特性

1） 来源：ASPC-1耐药筛选

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1×10^6  细胞数             

4） 用途：仅供科研使用

细胞处理

1）冻存细胞的复苏

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4~6mLwan全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm/min离心3~5min，弃去上清液。加入1mLwan全培养基重悬细胞后，均匀铺于含6~8mLwan全培养基的培养瓶（或皿）中，置于37℃恒温细胞培养箱中过夜培养。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

注意：①细胞复苏过程中，不可使用含有药物的培养基。须在细胞生长至汇合度达80%左右时，方可添加400ng/mL ADR药物；若细胞生长状态较为缓慢，可适当降低ADR的浓度（shou次降低一半药物浓度），或使用不含药物的wan全培养基培养至细胞生长状态较好时，再更换为所需的ADR浓度。

②建议复苏细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩，避免冻存管处于温差较大情况下发生爆炸，造成人员伤害。

2）细胞传代（建议以同等底面积的培养瓶/皿按照1：2比例传代）

①待细胞密度达到80%~90%时，即可进行传代培养。

②弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1次，吸净残余的PBS。

③加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化2~5min，显微镜下观察细胞细胞大部分变圆并脱落，即可轻拍培养瓶至细胞全部脱落。迅速拿回操作台，加入2倍体积的、含10%FBS的培养基中止消化。

④将细胞悬液移入离心管中，1000rpm/min离心5min，弃去上清液。

⑤向细胞沉淀中加入1~2mLwan全培养基重悬细胞，轻吹混匀。将细胞悬液按1：1的比例均匀铺于2个新的培养瓶/皿中，添加6~8mLwan全培养基。

注意：细胞传代1~2次后仍能保持增殖，即可提高药物浓度至500ng/mL继续培养；若此过程中细胞停止增殖，且状态较差，则需降低药物浓度（首ci降低一半药物浓度）或使用不含药物的wan全培养基培养，至细胞汇合度约80%，且生长状态较好时，再更换为所需的ADR药物浓度。

3）细胞冻存

①细胞冻存时，步骤同2）细胞传代的①~④，细胞计数后，加入配制好的细胞冻存液，重悬细胞，按照1×10^6 ~ 1×107个细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

注意：细胞冻存过程中，不可添加药物。

②将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

细胞培养生长缓慢的原因及解决方法？

1、由于更换不同培养液或血清； 2、培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏或已被破坏； 3、培养物中有少量细菌或真菌污染； 4、试剂保存不当； 5、接种细胞起始浓度太低； 6、细胞已老化； 7、支原体污染 。 解决方法： 1、比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液； 2、换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子； 3、用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物； 4、血清需保存在-10到-20℃。培养液需在2-8℃避光保存。含血清wan全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完； 1、增加接种细胞起始浓度； 2、换用新的保种细胞； 3、分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

悬浮细胞成簇或者成团的原因及解决方法?

可能原因： 1、培养液中含钙、镁离子 ； 2、支原体污染； 3、蛋白酶过度消化使得细胞裂解； 4、DNA污染 。 解决方法： 1、用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸细胞获得单细胞悬液； 2、分离培养物，检测支原体； 3、用DNaseI处理细胞。

人白血病阿霉素耐药株 K562/ADR

人卵巢癌腺癌阿霉素耐药株 OVCAR-8/ADR

人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株 HCT-15+5FU

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞 U251MG/TMZ

人乳腺癌阿霉素耐药细胞株 MCF-7+adr

人舌鳞癌顺铂耐药株 CAL 27+DDP

人口腔鳞癌顺铂耐药株 SCC25+DDP

人胃癌顺铂耐药株 AGS/DDP

人转移胰腺腺癌细胞吉西他滨耐药株 ASPC-1/GEM

人卵巢癌顺铂耐药株 SKOV3/DDP

人肺腺癌耐顺铂株 A549/DDP

人大细胞肺癌顺铂耐药株 NCI-H460/cis

人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株 LOVO+5FU

胃癌顺铂耐药株 SGC7901/DDP

吉非替尼耐药PC-9GR PC-9GR

肺癌紫杉醇耐药株A549+Taxol　 A549+Taxol　

人肺癌阿霉素耐药株 A549/Adr

人肝癌阿霉素耐药株 BEL7402/Adr

人膀胱癌阿霉素耐药株 BIU-87/Adr

人结肠癌阿霉素耐药株 HCT8/Adr

人胃癌阿霉素耐药株 SGC7901/Adr

人结肠癌阿霉素耐药株 hct116/Adr

人肝癌阿霉素耐药株 SMMC-7721/Adr

人宫颈癌阿霉素耐药株 Hela/adr

人胃癌阿霉素耐药株 BGC823/adr

人卵巢癌阿霉素耐药株 HO-8910/Adr

人乳腺癌顺铂耐药株 MDA-MB-231/adr

人结肠癌紫杉醇耐药株  HCT8/Taxol

人白血病紫杉醇耐药株  K562/Taxol

人肝癌紫杉醇耐药株  BEL7402/Taxol

人胃癌紫杉醇耐药株  BGC823/Taxol

人宫颈癌紫杉醇耐药株 Hela/Taxol

人结直肠腺癌紫杉醇耐药株 HCT15/Taxol

人乳腺癌紫杉醇耐药株 MDA-MB-231/Taxol

人结肠癌耐奥沙利铂细胞株 HCT8/L

人结肠癌耐奥沙利铂细胞株 hct116/L

人肝癌耐奥沙利铂细胞株 SMMC-7721/L

人胃癌奥沙利铂耐药株 HGC27/L

人肝癌氟尿嘧啶耐药株 BEL7402/FU

人结肠癌氟尿嘧啶耐药株 HCT8/FU

人胃癌氟尿嘧啶耐药株 SGC7901/FU

人结肠癌氟尿嘧啶耐药株 SW620/5-Fu

人胃癌氟尿嘧啶耐药株 BGC823/FU

人宫颈癌氟尿嘧啶耐药株 Hela/FU

人肝癌顺铂耐药株 BEL7402/DDP

人膀胱癌顺铂耐药株 BIU-87/DDP

人结肠癌顺铂耐药株 HCT8/DDP

人乳腺癌顺铂耐药株 MCF7/DDP

人胃癌顺铂耐药株 SGC7901/DDP

小鼠白血病顺铂耐药株 L1210/DDP

人白血病顺铂耐药株 K562/DDP

人肝癌顺铂耐药株 Huh-7/DDP

人肝癌顺铂耐药株 SMMC-7721/DDP

人卵巢癌顺铂耐药株 HO-8910/DDP

人结直肠腺癌细胞顺铂耐药株 HCT15/DDP

人卵巢癌顺铂耐药株 A2780/DDP

人胃腺癌耐药株 AGS/DDP

人卵巢癌耐药株 SK-OV-3/DDP

人乳腺癌顺铂耐药株 MDA-MB-231/DDP

人结肠癌长春新碱耐药株 HCT8V

人肺癌吉非替尼耐药株 A549/吉非替尼耐药株

人肝癌索拉非尼耐药株 HUH-7/Sorafenib

人神经胶质母细胞瘤耐药株 U343/TMZ

人肺癌吉西他滨耐药株 A549/吉西他滨