Cegrogen胎牛血清A0500-3011(低内毒素)使用说明
1.初次开封胎牛血清如何化冻?
胎牛血清常规储存温度为-20℃,如果更加长期保存可以-80℃保存。解冻的时候不建议直接放在常温中(25-37℃)解冻,很容易产生絮状沉淀,进而有可能影响血清品质。建议的方式为先由-20/-80℃转移到4℃解冻,全部为液体后,再由4℃转移到室温。在解冻的过程中,需要随时晃动,使血清内成分和温度混合均匀,有助于减少沉淀的产生。解冻后,就可以把血清用15 mL或者50 mL无菌离心管分装冻存啦,可以根据自己使用血清的频率在4℃存放一管已化冻分装的血清,方便经常配制培养基,在4℃也不可以存放太久,最好在一个月内用完。解冻后的胎牛血清不可以在37℃或者室温存放太久,避免血清中重要的细胞生长因子失活而影响细胞状态。
2.血清的用量
原则上血清添加量不宜太多,通常添加5%、10%、20%。大部分细胞正常培养使用10%的血清浓度,部分细胞原代提取时使用20%血清。具体某一株细胞适应的血清浓度,需要根据细胞特性、实验目的摸索。
3.胎牛血清什么时候需要热灭活?
这就涉及到什么是热灭活。热灭活一般是以56℃,30 min来处理已解冻的血清,因为此加热步骤,可以使补体去活化,而补体所参与的反应有:溶细胞活性,平滑肌的收缩,肥大细胞和血小板组胺的释放,增强吞噬作用,淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。除了这些特殊实验要求,常规细胞培养需要热灭活吗?通常来说,热灭活对大多数细胞培养都不是必须进行的步骤,经此处理过的血清对细胞的生长作用很小,甚至可能会因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低,沉淀物增多等不好的影响。
4.更换血清的正确步骤。
养细胞的小伙伴经常会遇到同一个细胞需要更换血清的情况。如果将另一款血清配制的培养基直接用于细胞培养,可能会发现以前增殖很快的细胞突然变慢甚至逐渐脱壁死亡了。这种情况下,多数为细胞被以往的培养环境驯化,突然更换一个新的营养环境,哪怕是品质更好的血清,也可能会出现不适应的情况。通常来说,更换血清的时候我们会遵循梯度更换保证细胞可以适应。血清开始使用时,如果是重新复苏细胞,建议用原培养体系进行细胞复苏,待细胞状态恢复后再进行测试。测试时不建议直接100%换成新血清体系进行培养,应按照比例梯度替换。例如,先换液按照新旧体系1:3,第二次换液1:1,第三次换液3:1,而后替换。针对一些对培养体系较为敏感的细胞,需进一步细化替换比例。
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胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)和小牛血清(Calf Serum, CS)是两种常见的生物试剂,广泛应用于细胞培养和生物学研究。它们的主要区别在于哪些呢?
1、来源
胎牛血清(FBS):来源于怀孕母牛的胎儿血液。胎牛血清通常是在牛胎儿被取出后,通过心脏穿刺方式收集血液,然后分离血清。
小牛血清(CS):来源于出生后小牛的血液。通常收集3个月以下的小牛血液,再经过离心分离血清。
2、成分
胎牛血清(FBS):含有较高浓度的生长因子、激素和低水平的免疫球蛋白。这些成分对细胞培养非常有利,特别是对敏感细胞系的培养。
小牛血清(CS):含有相对较高的免疫球蛋白和低水平的生长因子。由于小牛已经暴露于外界环境,其血清中的免疫球蛋白水平较高,可能会影响某些实验结果。
3、使用领域
胎牛血清(FBS):
广泛用于各种细胞培养,包括哺乳动物细胞系、干细胞和初级细胞培养。由于其成分比较均匀和丰富的生长因子,它被认为是优质的血清类型。
小牛血清(CS):多用于培养耐受性较高的细胞系或在不需要高水平生长因子的实验中使用。也可以用于较低成本的应用或实验中。
4、价格
胎牛血清(FBS):
由于其高质量和广泛的应用,FBS通常比小牛血清贵得多。
小牛血清(CS):价格相对较低,适用于预算有限的研究项目。
5、优缺点
胎牛血清(FBS):
优点:成分均匀,生长因子和激素含量高,适用于大多数细胞系。
缺点:价格昂贵,有伦理争议。
小牛血清(CS):
优点:价格较低,可用于耐受性细胞系的培养。
缺点:免疫球蛋白含量较高,可能影响某些实验结果。
6、总结
胎牛血清和小牛血清在成分、来源和应用上有显著不同。胎牛血清更适合需要高质量培养条件的实验,而小牛血清则适用于较为耐受的细胞系和成本敏感的实验。选择哪种血清需要根据具体的实验需求、预算和细胞类型来决定。
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