MCF-7/ADR人乳腺癌阿霉素耐药细胞株培养手册

细胞名称：MCF-7/ADR人乳腺癌阿霉素耐药细胞株

种属来源：人

组织来源：乳腺，乳房

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

细胞代数：10代以内 

背景介绍：培养瓶中的培养基是不含药物的，待细胞状态良好，稳定生长时，（一般传2代保种），可以用含加含400ng/ml的阿霉素药物培养基来培养，期间会有少部分细胞悬浮起来，属于正常情况，通过换液去掉即可。待细胞稳定生长传2代后，使用的阿霉素药物浓度可提高到500ng/ml，冻存时请不要在培养基中加药物。

是否导耐药基因：是

细胞规格：1x106cells/T25或1mL冻存管

支原体检测：无

培养基：89%DMEM+10%FBS+1%PS+0.01mg/ml insulin+500ng/ml ADR

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

一、细胞培养操作

TS25 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37度培养箱放置2-4h，以便稳定细胞状态；细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养；shou次传代建议1：2传代，1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，加2-3mlwan全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

3. 将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

冻存管  收到细胞后，需立即转入液氮冻存或直接复苏；第三天换液并检查细胞密度；一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶；将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心5 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。第三天换液并检查细胞密度。

二、细胞冻存操作

   无血清冻存液，液氮储存；待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例：

收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加 1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

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