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胎牛血清常见问题分析
更新时间:2022-12-26 点击量:611
  一、如何储存和解冻胎牛血清才不会使产品质量受损?  

未拆封的血清,一般情况下应存放于-10℃至-20℃,在产品规定的效期内均可使用,若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至合适大小的无菌离心管内,再放回冷冻。


将血清从冷冻冰箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融,或通过水浴锅促使其溶解。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。溶解后建议尽快使用,若长时间储存在2-8℃,血清中的各种(脂)蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可见的混浊。


总结:胎牛血清推荐在-10至-20℃条件储存,并避免反复冻融。


  二、胎牛血清中絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?  
上文提到,血清在非冷冻状态下存放时,其中的多种蛋白或脂蛋白会形成肉眼可见的沉淀。如血纤蛋白(fibrin),在解冻过程中可能会发生聚集,形成肉眼可见的沉淀,当遇到此类情况,我们可以如下应对:
◆ 将冷冻保存的血清取出后,置4℃冰箱静止过夜;
◇待血清融化后,上下颠倒,轻轻混匀,继续4℃2-3小时;
◆ 轻轻吸取上层血清,分装,余底下50ml左右;
◇低速离心5分钟,去掉沉淀。



  三、如何避免胎牛血清中产生沉淀?  


◆ 解冻时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一;

◇分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡);

◆ 切勿由-20℃直接至37℃水浴锅解冻,较大的温差,易造成蛋白质凝结而发生沉淀;

◇切勿将血清置于37℃过长时间,否则可能使之浑浊,其中一些不稳定的组分也会因此受到影响,最终降低血清的品质;

◆ 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤;

◇若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且保持摇晃均匀。温度过高、时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。


  四、胎牛血清中的“黑胶虫"是怎么回事?  


在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动,类似布朗运动,这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体,目前业内人士称其为“黑胶虫"。


黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。黑胶虫一般是存在血清里的,而血清通常是经过0.1μm滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物。如果说黑胶虫不是生物,它会不断增多,达到一定数量时会与细胞竞争性生长,与细胞竞争培养基中的营养,从而使得细胞营养不足而死亡。