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透析胎牛血清的生产工艺
发布时间:2022-12-12 点击量:164

一、透析胎牛血清的生产工艺

1、透析胎牛血清是在胎牛血清的基础上进行加工的。
胎牛血清在无菌条件下要经过多重过滤,进行一系列的检测:

理化性质检查(如渗透压和pH值)

成分检查(如内毒素和血红蛋白)

外源因子检查(如细菌、病毒和支原体)

促进细胞增殖的检查等


透析胎牛血清为保证其性能和安全性,也需具备胎牛血清的这些工艺和检查。


2、透析胎牛血清,需经过透析处理。

4°C下用特定的透析膜对血清在0.15M NaCl中透析。由于该透析膜只允许10 kDa以下的小分子穿过,在渗透压的作用下,这些小分子便从血清中渗析到透析膜外的NaCl溶液中。10 kDa以下的小分子有化学小分子、核苷酸、某些激素、盐、低分子量蛋白质、氨基酸、细胞因子、葡萄糖、残留抗生素和其他外源分子。

 

那么透析的效果如何?以及透析到何时呢?

 

由于不可能监测全部小分子,因此常选用葡萄糖为代表。血清中葡萄糖<5 mg/dL,即可以停止透析了。透析过程中,除监测葡萄糖浓度外(可采用葡萄糖氧化酶方法测定),还需仔细监测pH值和渗透压。

3、该透析一般采用切向流过滤tangential flow filtration

也就是液体流动方向与过滤方向呈垂直方向的过滤形式。该方式使液体流动在滤膜表面产生剪切力,减小了滤膜上的物质堆积,保证了稳定的过滤速度。

透析胎牛血清

二、 透析胎牛血清的应用


透析胎牛血清主要用于可能需要关注小分子浓度的特殊研究。这主要包括四个领域,其中有些领域是相互交叉的,透析胎牛血清应用广泛,以下仅稍作举例。

蛋白质组学

同位素标记

细胞通讯

报告基因细胞系的筛选

1、 细胞培养条件下稳定同位素标记技术(简称SILAC)。
这是一项以质谱为基础的定量蛋白质组学技术,全称为Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它将13C15N标记的氨基酸掺入到培养基中培养细胞,来标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。然后质谱分析,即可比较经过不同处理的细胞,其内部蛋白质丰度的变化。它还可用于正常细胞与病理状态细胞二者的比较。为避免胎牛血清中天然氨基酸的干扰,这时就需要用到透析胎牛血清,以保证掺入细胞蛋白中的氨基酸均为标记氨基酸(常采用赖氨酸或精氨酸)

2、工程细胞株的筛选。
以常见的工程细胞株CHO-DFGRˉ为例,该细胞自身缺乏二氢叶酸还原酶DHFR,必须在添加了次嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培养液中才能得以存活。如将含有目的基因与DHFR基因的质粒转染细胞,则可以得到在不含上述添加剂的培养基上也能生长的细胞克隆。通过甲氨蝶呤MTX进一步筛选,可进一步得到能表达大量目的蛋白的细胞克隆。这时的胎牛血清由于不含有次嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作为选择培养基的一部分,参与阳性转染细胞克隆的筛选。
3、研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、锌对某种类型细胞增殖、分化的影响。
这时也需要用透析胎牛血清,以避免培养体系中天然存在的这些物质的干扰。



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