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细胞污染防治方法
发布时间:2022-06-17 点击量:40

细胞污染防治方法

1.细菌污染

细菌污染是细胞培养中最常见的污染,主要由操作不慎或使用了灭菌不完全的耗材与试剂引入。最常见的有枯草杆菌、大肠杆菌、假单胞菌及白色葡萄球菌。镜下形态则为长杆状、短杆状和颗粒状等。

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左边的就是比较典型的杆菌污染,一般杆菌会延轴向快速游动,量少时培养基澄清。右图是颗粒状污染,一般培养基会浑浊或有白色沙状沉淀。

 

好氧菌增殖分裂迅速,感染24h内即可使培养基浑浊;厌氧菌在常规细胞培养条件下增殖缓慢,需要较长时间才会观察到浑浊现象。

 

污染处理:由于国内细胞培养中抗生素使用泛滥,所以出现污染后加双抗(青霉素&链霉素,Penicillin + Streptomycin)一般没有效果。杆菌可选用100ug/ml庆大霉素处理一周,颗粒状细菌可用25ug/ml环丙沙星处理一周,效果相对还不错。

 

2. 真菌污染

细胞培养中最常见的污染真菌有:烟曲霉、黑曲菌、毛霉菌、白色念珠菌、酵母菌等。

左边这张是比较典型的霉菌污染的图片,右图是酵母污染,镜下可以看到明显的出芽形态。

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污染处理:可用100ug霉素B/T25瓶,处理一周。

注:两性霉素毒性较大,需要在细胞有50%以上且状态没受大影响前处理。

 

3.支原体污染

支原体的危害:支原体污染可以改变细胞的特性。例如部分支原体会快速消耗培养液中的精氨酸,与细胞竞争营养,从而使细胞的生长速度减慢或停止;同时支原体还可以改变细胞的酶谱、细胞膜成分,造成细胞染色体异常或细胞病理性改变等。上述情况会严重影响到使用这些细胞所做实验的结果,导致结论不可靠。

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(PCR法检测细胞上清中的支原体污染)

支原体的预防与清除:由于支原体无法在镜下直接看到,需要通过PCR法等进行检测才发现,出现污染后比较难发现。建议在养细胞每月检测一次并结合每周抽检,做到有污染早发现。对于正在进行支原体去除处理的细胞建议每周必检,直至出现阴性结果并至少维持一月不同的细胞分开处理,优先处理“支原体阴性"细胞,后处理正在做去除处理的和受感染的细胞。同时,新引进的细胞系都进行支原体检测,确保不给实验室带来新的污染。

 


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