WINSERA胎牛血清为什么要热灭活血清?有必要做热灭活吗?
加热可以灭活血清中的补体系统,使补体去活化。通常未灭活的补体能够刺激平滑肌收缩、肥大细胞和血小板组胺的释放、激活淋巴细胞和巨噬细胞,同时还能够参与溶解细胞的过程。
诸多研究表明大多数细胞的培养无须进行血清的热灭活;而在免疫学研究和ES细胞、昆虫细胞、平滑肌细胞的培养过程中,推荐使用热灭活血清。实验显示,经正确热灭活处理的血清,对细胞的生长只有微小的促进或*没有促进作用,而通常因为高温处理影响了血清的质量,造成细胞生长速率降低。并且热处理过的血清,沉淀物明显增多,倒置显微镜下观察呈“小黑点",往往会使研究者误以为是血清受到了污染,而把血清放于37℃中,沉淀物又会更增多,有会使研究者误认为是微生物的分裂增殖。因此我们建议若非必须,可以不进行热处理,既节省时间又确保质量。
热灭活方法?
加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养 ES 细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。若必须做血清的热灭活,请遵守56 ℃,30 分钟的原则,并且随时摇晃均匀。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
1. 用上述描述的方法将血清在低温冰箱或室温下解冻。
2. 在血清解冻时,将一个容器装入适量的水,用于模拟装有血清瓶子在热处理过程中检测瓶内水的温度。容器大小、质地和装水的量最好与装血清的瓶子相同或相似。
3. 待血清*解冻时,将含有血清的瓶子放在预热的 56 ℃水浴里,不要将含有血清的瓶子让水淹没或接近瓶子的盖子,以免导致污染。
4. 在开始加热处理时,要及时使用温度计测定模拟瓶内水的温度。
5. 在预热期间,每隔 3-5 分钟要适当摇晃含有血清和水的瓶子,确保瓶内液体均匀加热。6. 一旦模拟瓶内的水温达到 55.8± 0.5 ℃时,开始计时,并在此温度范围内热处理 30 分钟,然后立即放在冰上冷却。
为防止在热处理过程中由蛋白质变性而导致的浑浊和沉淀现象,热处理时应注意下列事项:
不要用高于 25 ℃ 以上的温度加快解冻速度。
2. 在热处理之前,要使血清*融解。
3. 不要使热处理的温度高于 56.3 ℃
4. 热处理时间不要长于 30 分钟。
5. 在加热过程中一定要定时摇动血清。
上一篇:ScienCell常见问题解答
下一篇:细胞生长变慢的原因?