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肾小球分离、移植培养
发布时间:2022-04-26 点击量:155

肾小球分离、移植培养


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SD 大鼠颈椎脱臼法处死,75%乙醇浸泡 1~2 分钟,2 次,置超净台内,打开腹腔取出肾脏剪碎,置含 Hank's 液的无菌培养皿洗涤,置 80 目不锈钢筛网上。

用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网,滤过组织 Hank's 液混合物用吸管吸至120目不锈钢筛网,滤过,去小组织块,滤过物吸至200目不锈钢筛网,轻轻滤过, Hank's液洗涤 次, 收集网上肾小球, 镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用 0.2%胰酶、0.1%胶原酶,37℃消化20 分钟,加血清终止胰酶反应,离心除去胶原酶。处理过的肾小球计数后接种至24孔培养板或25ml培养瓶,使肾小球大于60个/cm2,加培养基5~10ml(培养基组成:F12—3T3 上清 1:1;5% 马血清;2.5%胎牛血清;胰岛素 5μg/ml;25ng/ml 氢化松;5μg/ml转铁蛋白;25ng/ml 前列腺素 E1;甲状腺素 0.02ng/ml;D-缬氨酸 150ng/ml)肾小球培养 8~10 天,去除肾小球未生长组分,细胞继续培养 24 小时,形态学观察:细胞生长成单层多角型细胞,直径约 100μm。



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