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细胞冻存&细胞复苏
更新时间:2022-04-08 点击量:702
03细胞冻存:


试剂:冻存液,PBS,胰酶,含血清的培养基;
流程:要冻存,先配置冻存液,冻存液包含了:DMSO:防止在低温(零度以下至-196℃)保存细胞时,细胞内液会形成冰晶,渗透压会发生改变,细胞结构会出现紊乱,会导致细胞出现损伤。冻存液制备时,一般需与血清一起配置:因为两者互融时,会散发热量,所以冻存液需提前制备。
因为细胞太多了,需要冻存,所以要先看一看,吸一吸,洗一洗,分一分,中和一下,吹打制成细胞悬液,离心,吸掉上清液,加入冻存液,轻轻吹吸均匀,每管等量1ml装入冻存管,4℃20min,-20℃30min,-80℃过夜,最后放入液氮罐。
04细胞复苏:
试剂:含血清的培养基;
流程:从液氮中取出冻存管,迅速(小于3min)置于37℃水浴锅中,解冻时,边晃动边观察,当看到只有一小块冰存在时,即可从水浴锅中取出,打开冻存管,迅速将细胞悬液吸到离心管中,轻轻混匀,1000r/min,离心五分钟,吸掉上清液,沉淀中加入适量培养液,放入孵箱中,培养。还有就是:复苏的细胞,需要在24小时后,换一次培养液。