如何避免细胞培养过程中的污染?
主要还是考虑无菌环境,尽量做好操作台的灭菌,别把培养基滴落在生物安全柜的入风口,别在培养箱里把培养基打翻。这两个地方霉菌一旦滋生,那你就只能等着用甲醛熏蒸了。
紫外无法杀灭霉菌,酒精也不行,只能用甲醛熏蒸,但是一定要注意安全。复苏的时候,水浴锅也需要进行灭菌处理。一旦出现污染,不要急,能救的就用抗生素救一下,但是一般情况下,选择扔掉。避免交叉感染,要不只能整个实验室消毒了。
如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?
原则上:直接灭菌后丢弃之。
当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2.分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,霉素b推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3.每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4.确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2~3代。
5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6.重复步骤4。
7.在无抗生素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。
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