外泌体是由细胞分泌的纳米级膜性小囊泡，直径约30~150nm。外泌体来源多样，广泛存在并分布于各种生物液体中，富含来源细胞的蛋白质、脂质和核酸，参与细胞间的信息交流。不同病理和生理条件下，外泌体的内容物不尽相同，因此外泌体可以很好地反映生物体的疾病与健康状态。此外，外泌体特殊的膜结构能够保护其内容物如RNA（microRNA、mRNA、lncRNA、circRNA）免受酶的降解，保证其能在各类体液中被稳定检测到，因此外泌体是研究各种疾病的良好生物学材料，可作为肿瘤潜在的biomarker和治疗靶点，亦可作为基因/药物的递送载体，在疾病的诊断和治疗方面具有广阔的应用前景。

据统计，2019年国自然中标的外泌体相关项目总计600多项，总金额高达2.5亿，相较2018年，总金额增长了44.5%，足可见外泌体研究的火热程度。近几年，随着高通量检测技术的飞速发展，对外泌体进行组学研究极大地推动了外泌体的研究进展。伯豪生物致力于科研服务，拥有高标准的样品处理平台、微阵列芯片平台、高通量测序平台、生物标志物平台、生物信息分析平台等多个平台，能够实现外泌体分离、鉴定、内含物（蛋白质、mRNA、ncRNA）检测及验证的“一站式”外泌体研究服务。

那么如何开展外泌体研究，第一步也是相当重要的一步就是收集外泌体含量高的样本。外泌体存在于各种生物体液中，如血液、乳汁、尿液，脑脊液，那么如何有效的收集各种类型的样本用于后续的外泌体分离呢，下面我们来简单介绍下各类型外泌体样本的具体收集方法。

注意：收集血清样本时一定不能加入抗凝剂。

1) 采集外周血（建议早晨空腹抽血），迅速转入不含EDTA的试管中；

2) 室温（22℃~25℃）下静置30分钟，或4℃下静置3~4小时，可见自行凝固；

3) 吸取上清至新的离心管中，4℃，8200×g离心10分钟；

4) 吸取上清至新的离心管中，4℃，16000×g离心10分钟；

5) 小心吸取上清至新的离心管中（1.5ml离心管，每管不超过1ml）， -80℃保存；

6）干冰寄送样本。

提示：建议送样量5 mL 以上（大致需全血8-10mL）

血浆

注意：收集血浆样本用于RNA研究时一定不要用肝素抗凝管。

1) 采集外周血（建议早晨空腹抽血），迅速转入EDTA抗凝管中，涡旋或颠倒混合5～10 次；

2) 在1小时（室温）或2小时（4℃）内进行血浆分离，8200×g离心10分钟；

3) 吸取上清至新的离心管中，4℃，16000×g离心10分钟；

4) 小心吸取上清至新的离心管中（1.5ml离心管，每管不超过1ml），-80℃保存；

5）干冰寄送样本。

提示：建议送样量5 mL以上（大致需全血8-10mL）

Tips: 血液样本外泌体研究血清好还是血浆好？

血浆=血液-血细胞；血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子；血清是血液凝固之后收集的液体，在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌，所以一般实验会选择血浆。在特殊情况下，如研究与血小板相关疾病的时候，血清比血浆更适合。此外，在采血后最好尽快处理样本，因血液收集到收集管后，血细胞和血小板会继续分泌外泌体

细胞上清

注意：细胞培养基必须使用去除外泌体的血清或者无血清培养基

1) 正常含有血清的培养基中培养细胞24h左右，贴壁细胞密度达到70%~80%，悬浮细胞密度达到60%~70%；

2) 将原有血清培养基更换为去除外泌体的血清或者无血清培养基（贴壁细胞直接去除原有培养基，加入适量PBS缓冲液冲洗一次，更换新的培养基；悬浮细胞4℃，300×g离心10分钟，收集细胞后，加入适量PBS缓冲液冲洗一次，更换新的培养基）继续培养；

3) 培养48-72小时后，根据细胞数量确定收取上清时间；

4) 4℃，300×g，离心10分钟收集细胞上清；

5) 4℃，3000×g，离心15分钟，确保将细胞及细胞碎片去除干净；

6) 吸取上清，-80℃保存；

7）干冰寄送样本。

提示：送样量最好在50 mL 以上，不少于30ml

尿液

1) 收集清晨第一次尿液50ml，注意避免细菌污染，收集前注意饮食控制，前一晚22:00后禁食禁水；

2) 4 ℃ ，3000×g，离心15分钟，去除细胞或细胞碎片；

3) 收集上清尿液分装转移至15ml离心管中，-80℃保存；

4）干冰寄送样本。

提示：送样量最好在50 mL 以上

脑脊液

1) 收集脑脊液，收集过程中避免血液污染；

2) 3000×g，离心15分钟，去除细胞或细胞碎片；

3) 收集上清，-80℃冰箱中保存；

4）干冰寄送样本。

提示：送样量最好在20 mL 以上

注：以上建议的送样量综合考虑了外泌体的表征检测（TEM、NTA、WB）和组学研究（转录组、蛋白质组）的样本需求量。上述细胞上清送样量主要指常规肿瘤细胞，对于其他类型细胞，最好在送样前进行预实验，以确定外泌体含量。

目前外泌体的分离方法中应用广泛的是超速离心法和试剂盒抽提法，超速离心法是外泌体分离的金标准，是高分文章常用的分离方法，获得的外泌体纯度高。其原理主要是依据外泌体与其他微小囊泡密度和大小的不同而分离，通过逐步提高离心速度，有效去除细胞、细胞碎片和大囊泡，收集高纯度的外泌体。外泌体抽提试剂盒分离外泌体省时省力，外泌体纯度高，SBI外泌体抽提试剂盒，样本需求量少，最少可从100ul血清或5ml细胞上清中分离外泌体。利用超离或试剂盒法分离获得的外泌体，经表征检测确定后即可进行后续的组学研究。

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