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培养RAW264.7细胞常见问题及原因分析
发布时间:2021-11-02 点击量:207

   在日常培养过程中发现RAW264.7细胞容易出现的问题主要为以下几种:

     


1.复苏不易成功2.细胞形态变异明显3.消化困难4.细胞生长缓慢,当你的细胞培养遇到上述瓶颈,不妨试一试以下几种解决办法。

1、复苏难以成功

原因:RAW264.7对空间十分敏感,复苏密度太高,细胞增殖太快,加剧细胞营养缺失,加速细胞老化。

解决办法:T75培养瓶复苏细胞数量控制在104~105

2、细胞变异明显

原因:细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会促使该细胞呈现梭形、长梭形

解决办法:改善细胞培养环境,例如与细胞接触的玻璃器皿均高温灭菌,换flask培养瓶,采用一次性器具,使用质量较高的胎牛血清

3、消化困难

原因:细胞老化后,细胞伪足多且长,使细胞难消化,使用胰酶或细胞刮会对细胞损伤较大

解决办法:无需胰酶使用吸管重复吹打,可消化大部分正常状态的细胞;但若细胞为“长脚"状态,即使加入胰酶消化超过10min,也难以消化下来,勉强消化,对后续的实验数据也有较大影响。

4、生长缓慢

原因:支原体污染会导致细胞生长缓慢,甚至难以贴壁

解决办法:定期进行支原体检测,如发现支原体污染,即刻使用支原体去除试剂


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