血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?

近期，有些客户再使用我司胎牛血清过程中，发现血清融化后有些许沉淀（类似头皮屑的东西），担心影响质量，不敢使用！莫怕，莫怕，小编搜集了些资料，供大家参考！

血清中沉淀物的出现有许多种原因，

但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的原因之一。

但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。

若欲去除这些絮状沉淀物，

可将血清分装至无菌离心管内，以400转/分离心1-2分钟,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。

尽量不使用过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

在解冻血清时，建议随时将血清摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。

各个大佬也有相关说明，如图：

SIGMA公司：

BI公司：

胎牛血清保存方法

血清应保存在-5℃至-20℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

a、如何解冻血清才不会使产品质量受损？

将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

b、避免产生沉淀物

1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2℃至4℃至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃，实验显示非常容易产生沉淀物。

2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生

3、请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

5、若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理?　欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。但不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

c、何谓热灭活

一般是以56℃，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活化，而补体所参与的反应有:溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

d、有必要做热灭活吗

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或*没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒立显微镜下观察，像是 "小黑点"，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者误认为是微生物的分裂扩增。购买的时候注意询问厂家是否是已灭活血清。

e、保存注意事项

（1）需要长期保存的血清必须储存于-20℃至- 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前,必须预留一定体积空间,否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

（2）热灭活是指56℃，30分钟加热已*解冻的血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理的目的是使血清中的补体成分灭活。除非必须，一般不建议作此热处理，因为热处理会造成血清沉淀物显著增多，而且还会影响血清的质量。补体参与反应有：细胞毒作用，平滑肌细胞收缩，肥大细胞和血小板释放组胺，增强吞噬作用，促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化。

（3）瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室温，待全部溶解后再分装。在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一，减少沉淀的发生。切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻，这样因温度改变太大，容易造成蛋白质凝集而出现沉淀。

（4）一般厂商提供的血清为无菌，无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤，切勿直接过滤血清。

（5）血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身的质量。可用离心3000rpm, 5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下“小黑点”:经过热处理过的血清,沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑点不会影响细胞生长，但如果怀疑血清质量，则应立即停止使用,更换另一批号的血清。

（6）切勿将血清在37℃放置太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中的有效成分会破坏而影响血清质量。

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