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10099-141胎牛血清包含絮状沉淀是什么?怎么处理?
发布时间:2020-09-03 点击量:83

10099-141胎牛血清包含絮状沉淀是什么?怎么处理?

对于想细胞的小伙伴们,都知道,胎牛血清是细胞培养中的重要试剂之一,但是在使用过程中,总会有各种问题出现,以下大家可以做个参考!

一、胎牛血清的概况:

血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。主要是:血清的成份可能有几百种之多,对其准确的成份、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;

第二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;

第三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。

胎牛血清主要作用

提供基本营养物质:氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等,是细胞生长必须的物质。

提供激素和各种生长因子:胰岛素、肾上腺皮质激素(地塞米松等)、类固醇激素(雌二醇、睾酮、孕酮)等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。

提供结合蛋白:结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质,如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等,转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。

提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。

对培养中的细胞起到某些保护作用:有一些细胞,如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。这种作用是偶然发现的,则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保护细胞免受机械损伤,特别是在悬浮培养搅拌时,粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子,他们在代谢解毒中起重要作用,如SeO3,硒等

三、胎牛血清常见问题及处理办法:

1、血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?

沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响品质。

如要除去沉淀,离心(400g,1-2分钟)或让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一无菌瓶中(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。

所以,使用时摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。

2、 如何避免血清中产生沉淀?

如下操作可避免沉淀的产生:

(1) 解冻血清时,请随一边解冻,一边摇匀,使温度及成分均一,减少沉淀产生。

(2) 血清分装冻存时,规则摇均(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,易使蛋白质凝结而发生沉淀。

(4) 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清品质。

(5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,无须做此步骤。

(6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且一边热灭火,一边摇匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

3、 如何储存和解冻血清不会使血清品质受损?

将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃使之融解,然后在室温下使之全融。

但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。

长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。

 因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。若存放于4℃时,请勿超过1个月。

若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

4、如何选择适合的血清? 

国内一致认为HYCLONE的血清是的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为GIBCO比HYCLONE好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内HYCLONE,GIBCO并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。所以,我一般会从直销员那里买血清,有的国外生物公司由于刚刚进入中国,知名度不高,但是其实在国外已经做得很不错了,如Wisent等,他们在国内有办事处,我会从那里拿,血清的品质和HYCLONE不相上下,但价格相对优惠很多。

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