PANC10.05细胞，人胰腺癌细胞

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PANC10.05细胞，人胰腺癌细胞特性

1） 来源：胰腺

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10⁶

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后一次传代建议1：2传代 。                       

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备1640 基础培养基，优质胎牛血清15%，P/S 1 %

牛胰岛素0.01mg/ml。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类；

      1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

      2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10⁶/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

      3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

PANC10.05细胞，人胰腺癌细胞收到注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

关于细胞的复苏需要注意几点：

A. 整个复苏过程尽量手脚麻利一些，战线拉得太长可能影响复苏效果；

B. 由于“化冰”这一步里冻存管与水温差太大，尤其是液氮里来的冻存管，放到水里可能会造成翻江倒海的既视感，所以，如果有些萌妹纸害怕的话，可以用镊子夹住冻存管往水里摁，这样即使有炸裂的情况也会有水做缓冲；

C. 取冻存管时要谨防冻伤，尤其是夏天，尽管热也好穿长袖白大褂，一些不经意的动作可能会把你的小鲜肉“粘”到冰箱门上

D. 离心这一步也可以在冻存管里的冰融化后直接进行，也就是直接把冻存管离心，离心后弃去原来的冻存液，然后直接加*培养基重悬细胞，接着把细胞转到培养皿/瓶里培养。这种方法也许不能将DMSO清除得很干净，但是就本侠的现有经验来看，似乎影响不大。更有甚者，冰化完后干脆不离心，也不洗DMSO，直接用冻存液重悬了细胞就放到培养皿/瓶，加*培养基混匀就放培养箱了，第二天来换个液就当一切都没发生过，足够、大气、上档次！童鞋们如果够懒，也可以尝试这种“懒人法”；

E. 复苏第二天记得去看看细胞呀，如果状态还不错的话就说明复苏成功啦；

后本侠还是要唠叨一点细胞培养箱的重要性，如果培养箱不给力，就不要怪细胞不给面子。培养箱的道道很多，有机会本侠会出番外篇专门讲培养箱，这儿呢就简单说一些比较重要的注意点：1、培养箱里的水盘要一直有水，不然细胞会干死；2、培养箱上显示的二氧化碳浓度要保持在5%，不然会导致PH异常，影响细胞生长；3、定期用酒精等擦洗培养箱内部架子、水盘，防止污染发生。

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