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苏州千舍生物小课堂:“胎牛血清知多少”
发布时间:2020-04-09 点击量:96

►胎牛血清知多少?

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体,是血浆去除纤维蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类和维生素、多肽(如生长因子、胰岛素、促生长激素)等。血清是细胞培养过程重要的营养物质,同时也对细胞起到一定的保护作用。

►胎牛血清重复冻存和解冻

经过5次解冻/冻存循环的血清在细胞生长性能、生化分析数据和浊度方面没有明显的变化,我们认为血清经多次解冻/冻存循环(可达5次)之后,不会影响细胞的生长。虽然测定数据显示,经过多达5次解冻/冻存血清性能并未出现明显的下降,但反复冻融会造成血清的沉淀增多,给后续处理带来麻烦,我们建议血清的解冻/冻存次数越少越好。

►胎牛血清储存和使用方法

我们建议血清储存在-10℃或更低温度条件下。产品效期是基于-10℃储存条件的稳定性研究。然而,研究表明储存在-80℃下的血清,在性能方面也没有任何变化,但我们建议不要在-80℃条件下储存,解冻时巨大的温差会导致更多沉淀的产生。一旦解冻,血清可在2-8℃条件下储存6周,且维持产品质量。如果解冻之后的血清储存时间大于6周,我们建议分装成合适的体积并重新冻存。

►胎牛血清解冻方法

首先将冻存的血清移到2-8℃的冰箱中,过夜;于37℃水浴,间歇性摇晃混匀底部的溶解物。解冻之后的血清不要长时间放置在37℃下。若血清没有混匀且放置于高于40℃的水浴中,底部的蛋白会变性形成沉淀。不推荐高温解冻血清。在解冻或长时间储存之后,血清中会出现浑浊物和絮状物。在解冻过程中,需不断的摇晃混合以阻止形成梯度及沉淀。由于血清的不同成分解冻速率不同,当解冻时,若无混合操作,会形成一个梯度。如果血清一直保持此梯度状态,随后会形成沉淀。

►最后再给大家带点福利,认清血清沉淀的“真面目”:

1、用于细胞培养的胎牛血清及其它血清产品存在各种类型的沉淀。除了胆固醇和一些蛋白沉淀之外,血清中也会含有纤维蛋白和磷酸钙。虽然沉淀可引起初始问题,但在细胞培养应用方面,沉淀不会对血清的性能产生影响。

2、纤维蛋白

清中的纤维蛋白通常为肉眼可见的较大物质(可达1-2 mm)。由于血清在低温条件下收集并迅速加工处理,导致一些纤维蛋白原(纤维蛋白的前体)仍存在于溶液中。在过滤之后,血清中的纤维蛋白凝固并沉淀。

3、磷酸钙

磷酸钙也是血清产品中常见的沉淀,通常表现为云状物。倒置显微镜观察,发现许多小黑点。由于布朗运动,这些黑点可自由移动。

磷酸钙沉淀物通常被误认为微生物污染。在37℃孵育之后,血清中的磷酸钙沉淀物会增加。因此,我们建议不要直接用37℃孵育的血清测试无菌性。将1 mL的待测血清直接倾倒于细菌琼脂平板(例如胰酪蛋白胨大豆琼脂),37℃培养之后观察菌落的生长情况。油镜(放大1000倍)下观察革兰氏染色,判断是否污染。

►细胞生长

测试及经验表明,沉淀不会改变血清作为培养基添加物的性能。这已经被客户及其它厂家证实。

过滤

如果血清中含有大量的沉淀,我们不建议进行过滤血清。若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管中,以400g稍微离心,上清液可接着加入培养基内一起过滤。

沉淀物的控制

血清中的沉淀很难预测和阻止,沉淀不会改变血清的性能,但在正确的储存和使用操作会降低血清中沉淀的析出。

如下条件会增加沉淀:

  •血清热灭活;

  •37℃孵育;

  •重复冻存与解冻操作;

  •解冻工程中为未混合;

  •γ-辐照;

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